旋复花(inua britanica l.)中抑制妇科肿瘤细胞增殖活性化合物的筛选及其作用机制的研究.pdfVIP

中文摘要 britanica 旋复花(1nula L．)中抑制妇科肿瘤细胞增殖 活性化合物的筛选及其作用机制的研究 摘 要 L．)植物全世界约有100种， 目的：菊科旋复花属(Inula 分布于欧洲、亚洲及非洲，以地中海地区为主，我国有20 余种。旋复花为菊科的多年生草本植物，是-loo传统的中草 药，多年来一直用于治疗胃肠炎、支气管炎及结核性腹泻等。 目前报道旋复花的化学成分主要有黄酮类、倍半萜内酯类和 萜类化合物，其中证明有药理活性的成分大多数为倍半萜内 酯类化合物，具有抗炎、抗肝损伤、抗肿瘤和细胞毒等作用， 对糖尿病也有疗效。本实验以人子宫颈癌细胞株(HeLa)、人 人卵巢透明癌细胞株(HOC．21)和人卵巢囊腺癌细胞株 (HAC一2)为材料，研究旋复花中化合物异土木香内酯、1．氧． 乙酰大花旋复花内酯和大花旋复花内酯对这5种妇科肿瘤细 胞的体外生长的抑制作用，并进一步探讨旋复花中单体化合 物异土木香内酯抗HeLa细胞增殖的作用机制。 方法： 1 MTT(四甲基偶氮唑蓝)比色法 1．1肿瘤细胞株悬液制备 为2×105个／mL的细胞悬液备用。 1．2实验用化合物的体外抑瘤实验 将HeLa肿瘤细胞株悬液接种于96孔培养板，每孔50 中文摘要 止，分别加入空白对照磷酸盐缓冲液、溶剂对照O．05％--甲 基亚砜、阳性对照顺铂(DDP)以及1 pmol／L、10pmol／L、100 pmol／L单体化合物各50此，每组均设3个复孔。置于培养 箱中培养48h，于培养结束前4h，各培养孔加入5mg／mL h后，弃去培养上清， 四甲基偶氮唑蓝(MTT)10止，培养4～6 每-孑L；gu入反应停止液150 min，使结晶充分溶解， p,L，振荡10 用酶联免疫检测仪检测各孔吸光度(OD)值，测定波长入=570 nm，参考波长入=620nm，并计算肿瘤细胞生存率。 1．3 活性化合物的广谱抗肿瘤细胞增殖活性实验 选择具有活性的单体化合物，考察活性化合物对人子宫 HOC．21)和人卵巢囊腺癌细胞株(HAC一2)的增殖的抑制作用。 2 流式细胞仪及AnnexinV．FITC试剂盒分析细胞凋亡 细胞传代进入对数生长期，实验组加入12．5 Irtmol／L的异 土木香内酯，空白对照组加入磷酸盐缓冲液，于培养48h后 收集细胞，用4℃预冷的PBS洗细胞两次，用250 p,L结合缓冲 液重新悬浮细胞，调解其浓度为1×106／mL，取100肛L的细胞 悬液于5mL流式管中，加入5“L 20 min，在 1．tg／mL的碘化丙锭溶液，混匀后于室温避光孵育15 反应管中力1400 1．tL稀释好的结合缓冲液，及时上流式细胞仪 分析。 结果： 1 MTT(四甲基偶氮唑蓝)比色法结果 旋复花中化合物具有明显的抑制妇科肿瘤细胞增殖活 性，异土木香内酯、1一氧一乙酰大花旋复花内酯和大花旋复花 中文摘要 有不同的抑制活性。其中异土木香内酯对HeLa、HEC．1、 HOC．21、HAC．2细胞的增殖显示较强的抑制活性，异土木 香内酯用lgmol／L、10gmol／L和100gmol／L处理HeLa细胞，