植物抗虫基因表载体的构建及丽江云杉遗传转化体系的建立.pdf

摘要：近年来马尾松、杉木、思茅松等主要针叶造林树种相继受到病虫害的影响损失 严重，林木病虫害危及我国林业生产的发展。因此，开展针叶树种抗虫研究，具有非 常重要的实践意义。利用常规的抗虫育种方法存在周期长、缺乏适宜的抗源等缺点， 而传统的化学防治又有成本高、污染环境的不足。应用转基因育种可以克服以上缺陷， 作为目的基因的苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因(Bt基因)是一种广谱杀虫剂， 对鳞翅目、鞘翅目等目的昆虫有良好的杀虫效果。本实验在改造后的Bt基因5’端 加上35S启动子，3’端加上NOS终止序列，成功的构建了植物抗虫基因表达载体 PBI—CrylA(b)。 虽然，通过转基因的方法，可以提高树木抗虫性，但由于针叶树种组培技术进展 缓慢，且存在很难建立有效的再生体系，转化效率较低等问题，这些因素严重制约了 针叶树种转基因技术的发展与应用。 本研究在成功的构建了植物抗虫基因表达载体PBI．CryIA(b)和已经建立了丽江 云杉的有效体胚再生体系的基础上，以丽江云杉的胚性愈伤为外植体材料，进行了农 杆菌介导的丽江云杉遗传转化体系的探索，为进一步以丽江云杉作为针叶树种的模式 植物，进行马尾松、杉木及思茅松等主要针叶树种抗虫基因遗传转化研究奠定基础， 并提供理论依据，本研究的主要内容和结果如下： 1植物抗虫基因表达载体(PBI．CryIA(b