人细胞色素P4502D64个单核苷酸突变株活性及其药物相互作用的体外研究.pdfVIP

中国医药生物技术2008年6月第3卷第3期 ·论著· 2D6 人细胞色素P4504个单核苷酸突变株 活性及其与药物相互作用的体外研究 江杨华，杨月珍，朱娟莉，陈超 【摘要】 目的 探讨单核苷酸替换对人细胞色素P450CYP2D6酶 用药的25％，包括抗心律失常药、13受体阻滞药、 活性及其与药物相互作用的影响。 抗高血压药、三环类抗抑郁药以及抗精神病药等【2J。 2D6又是极具多态性的药物代谢酶，它含有70多 方法 体外构建CYP2D6野生株(、ⅣT)和G169R、P34S、 个等位基因，100多个单核苷酸多态性(SNP)位 FAIOK、V7M等4个单核苷酸突变株的表达载体并在酿酒 酵母中诱导表达，裂解并提取各酶的蛋白微粒体，用蛋白质 点，与野生株(、W)相比，一些等位基因由于含 印迹法验证其表达，再分别测定各酶代谢底物丁夫洛尔和 有对酶活性起关键作用的1．2个SNP位点，常 常表现出没有活性或活性很低【3】。这种多态性可使 3．[2．(N，N二乙基．N．甲铵)乙基]．7一甲氧基．4．甲基香豆 约50％经南2D6代谢的药物的代谢过程受到严 素(AMMC)的米氏常数(Km)和最大酶促反应速度 重影响，导致在常规剂量用药的情况下出现药物副 2D6、VT和V7M、 (Vmax)。以AMMC为底物对CYP G169R进行高通量药物抑制实验，所选药物包括已知的作用【4】。同时，2D6的活性能被药物抑制而引起严 2D6抑制剂(奎尼丁、舍曲林)、底物(氯丙嗪、氟西汀、重的药物与药物相互作用【5】，且药物对酶活性抑制 阿米替林)和既非抑制剂又非底物的化合物(酮康唑、曲格 的程度因等位基因不同而表现出不同的差异【6】，导 列酮)，求得不同药物对不同酶的半数抑制浓度(ICso)。 致产生不可预测的药物不良反应。为了更好地理解 2D6基因型与表现型之间的关系，我们构建了2D6 结果 蛋白质印迹法检测显示各酶均表达良好。CYP2D6 WT代谢丁呋洛尔和AMMC的Km值分别为19．22、 V7M)，研究了单核苷酸替换对2D6酶活性及其与 2．06 Ixrnol·L1，Vmax值分别为154．53、21．60 pmol·min-1．mg～， 药物相互作用的影响。 Vmax／Km值分别为8．04、11．49山．min-I．mg～。与CYP2D6 wT比较，V7M代谢2种底物的Vmax值均要高得多 1材料与方法 (P0．05)，G169R和E410K均稍低，而P34s都要低 1．1 主要材料 很多(尸0．05)；各突变株的Km值也发生了或多或少的 2D6、ⅣT的cDNA购于美国OpenBiosystems 改变。药物对CYP2D6wT和V7M和G169R的抑制程 Platinum 度排序均为奎尼丁氯丙嗪氟西汀阿米替林舍公司；大肠杆菌TOPl0、DNA聚合酶Taq Mast