第四章固定化技术精要.ppt

第一节 概述 第二节 固定化酶的制备 第三节 固定化酶的性质及其影响因素 第四节 固定化细胞 第五节 固定化辅酶和原生质体 第六节 固定化酶（细胞）的应用 第一节 概述 优点：条件温和，操作简便，酶活力损失少。 缺点：结合力弱，易解吸附。 ① 重氮法： 这是带芳香族氨基载体的主要反应，即载体先用亚硝酸处理成重氮盐衍生物，然后再在温和的条件下和酶分子上相应的基团如酚羟基、咪唑基或氨基直接进行偶联。 ⑵ 肼解 ③ 溴化氰法： 带羟基的多糖类载体如纤维素、葡聚糖和琼脂糖等常用的反应。在碱性条件下载体羟基和溴化氰反应生成极活泼的亚氨基碳酸酯，它在弱碱中可直接和酶的氨基进行共价偶联反应。 ①严格控制反应条件，提高反应的专一性。 例如：使反应局限于α-氨基，保护ε-氨基； ② 应用可逆抑制剂或底物，封闭或牵制酶的活性中心与必需基团，避免试剂影响酶的活性构型和相应基团。 例如：在进行腺三磷酶(ATPase)固定化时，可先用对羟汞苯甲酸(PHMB)将酶的活性巯基保护起来，然后通过叠氮反应将酶偶联于羧甲基纤维素上，在完成固定化以后，再用还原剂使-SH活化，这样可得到高活性的固定化酶。 （二）细胞的固定化方法 基本概念 固定在载体上，并在一定空间范围内进行生命活动的细胞，称为固定化