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人尿中大豆异黄酮含量的测定资料.ppt
人尿中大豆异黄酮含量的测定 四小班:段从会 祖静宁 夏媛 许正兰 杨礼帆 杨丽香 杨梦云 王成业 缪雅筠 目的和要求 了解大豆异黄酮的基本信息 掌握高效液相色谱法测定大豆含量的方法和原理 大豆异黄酮的基本信息 大豆异黄酮(soybean isoflavone简称ISO)是一类从大豆中分离提取的主要活性成分,具有异黄酮类化合物的典型结构。大豆中天然存在的大豆异黄酮总共有12种,可以分为3类,即黄豆苷类,染料木苷类,黄豆黄素苷类,以游离型,葡萄糖苷型,乙酰葡萄糖苷型,丙二酰基葡萄糖苷型等四种形式存在 大豆异黄酮的测定方法比较 方法原理 尿液通过高效液相色谱仪的分离,分离出大豆异黄酮,根据标准曲线。得到人尿中大豆异黄酮的含量。 仪器和试剂 仪器:采用依利特高效液相色谱仪系统,包括:P230溶剂输送泵(两台)、UV230紫外检测器、柱温箱、DG230-2自动脱气机、EC2000工作站 试剂:乙腈、甲醇:色谱纯;水:自备超纯水;样品制备用溶剂为分析纯;异黄酮标准液 操作步骤 一.样品的采集 二.样品的预处理 三.仪器条件 四.标准曲线绘制 五.测量 六.计算结果 样品的采集 用聚乙烯瓶收集100ml尿样,测定比重后,冰箱中保存。 样品的预处理 吸取尿液3ml于10ml离心管中,加入5ml 95%乙醇振匀,在60℃水浴中超声10min,后放入离心机内离心5min,将离心上清液用定性滤纸过滤,滤液至10ml容量瓶。离心沉淀物加入3ml 80%乙醇振匀,在60℃水浴中超声10min,后放入离心机内离心5min,将离心上清液用定性滤纸过滤,滤液同样汇至10ml容量瓶,最后用80%乙醇定容. 仪器条件 色谱柱:Lichrosper 100RP-18(4.6mm×25mm;5μm);流动相:含0.1%(V/V)冰醋酸的水溶液(A溶液),含0.1%(V/V)冰醋酸的乙腈溶液(B溶液);时间程序:在35min内B溶液浓度从20%线性递增至40%;流量:1ml/min;检测波长:254nm;柱温:400C;进样量:5μl;分析时间:35min/样品。 标准曲线绘制 吸取标液0.2ml 0.4ml 1.0ml 2.0ml 3.6ml分别置于10ml的烧瓶中,分别加入色谱级甲醇,摇匀,取5μl各浓度的进行测定,制作标准曲线。 样品测定 在标准曲线相同条件下,取5μl待测夜进样分析,已保留时间定性,峰面积定量。 结果计算 c=a*V1/V2*k 其中c为尿中大豆异黄酮的含量,μg/mL;a为标准曲线查的的样品处理液中大豆异黄酮含量, μg/mL;V1为待测夜总体积;V2为尿样体积,mL;k为尿样换算成标准比重下的浓度校正系数。 注意事项 尿液久置产生沉淀,分析前应将尿液充分搅匀 每次实验完毕,需用水.甲醇依次冲洗色谱柱,以延长其使用寿命。 离心后要用真空泵尽量抽取,以免杂质干扰。 * * *
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