vegf和md1在急性髓系白血病中的表达及预后关系研究.pdf

VEGF和MDRI在急性髓系白血病中的表达及预后关系研究 摘 要 目的：急性白血病化疗后复发是临床治疗过程中普遍存在的情况，如 何在早期判断患者的预后，进行早期干预、个体化方案化疗，从而提高临 床治疗效果，就成为一个亟待解决的问题。血管内皮生长因子(vascular endothelialfactor growth VEGF)具有促进小静脉、微静脉通透性增加， 血管内皮细胞分裂、增殖以及诱导血管形成等作用，与血管生成和肿瘤的 生长、浸润、转移及预后密切相关。大量的研究证实VEGF在实体瘤的发生、 发展中起重要的作用，已成为影响肿瘤生物学行为和转移潜能的重要因素， 抗血管生成治疗实体瘤取得了可喜的效果。近年来，恶性血液病发生发展与 血管生成及VEGF的关系日益受到人们的关注；多药耐药基因 resistance1 一1(multi—drug geneMDRl)作为一个经典的耐药途径，国内 药物从细胞内转运到细胞外，导致细胞内药物浓度下降，产生耐药。另外， P—gp也可使药物在细胞内的细胞器之间重新分布，从而使作用位点的药物 浓度降低，以致耐药。肿瘤细胞中MDRl的过度表达将会导致对抗肿瘤药物 的耐药性，化疗的缓解率降低，预后差。本课题研究初诊未治急性髓系白 leukemia 血病(acutemyeloid AML)患者化疗前后血清VEGF的表达及骨 评价作用，不同临床因素如性别、年龄、骨髓中自血病细胞比例对二者表 达的影响，分析二者的相关性。为寻求一种更为简便可靠实用的判断AML 70(平均36．75)岁，均经临床、血液学和骨髓细胞形态与细胞化学染色， 部分经免疫学分型，参照FAB诊断标准确诊，FAB分型M。3例、M。12例、 均37．18)岁，均来自患其它疾病的住院病人，骨髓形态学正常，排除合并 肿瘤，结缔组织病及感染性疾病，女性均不在怀孕期及月经期。化疗方案 阿糖胞苷)或HDA方案(高三尖杉酯碱、柔红霉素、阿糖胞苷)进行诱导缓 小剂量高三尖杉酯碱诱导缓解。所有患者完成l～2个疗程标准剂量的诱导 化疗。复查骨髓并参照“血液学诊断及疗效标准”进行疗效判断，完全缓 解(CR)：①(原始细胞+早幼细胞)5％，红细胞及巨核细胞系正常。②血象： g／L(女性及儿童)，中性粒细胞绝对值≥ 血红蛋白1100g几(男性)或≥90 I．5×10讥，血小板，100X10yL，外周血分类无自血病细脆。⑨临床无白 血病浸润所致的症状和体征，生活正常或接近正常。40例AML患者化疗前 后血清及对照组血清VEGF的含量采用双抗体夹心酶联免疫吸附法 immunosorbentELISA)检测，检测原理是抗人VEGF (enzyme—linked assay 单抗包被于酶标板上，加入标本／标准品和生物素化检测抗体，两抗体与标 准品／标本中的VEGF形成“抗体-vEGF一抗体”复合物，游离的成分被洗去。 再加入辣根过氧化物酶标记的亲合素，生物素与亲合素特异性结合，未结 合的部分被洗去。加入显色剂，若反应孔中有VEGF，显色剂显蓝色，加终 绘制标准曲线求出标本中VEGF浓度；MDRl的表达用直接免疫荧光标记单 抗流式细胞仪(FCM)检测，流式细胞仪能对单个细胞和含有大量细胞和细胞 亚群的标本进行多参数分析，快速、客观、量化，P—gp是MDRl基因表达 的跨膜蛋白，可与被免疫荧光标记的特异性单克隆抗体结合，经流式细胞 仪激光激发识别，进行细胞的分选和计数，可以定量的检测白血病细胞P—gp 的表达百分比。结果：①初发和未缓解AML患者血清VEGF水平明显高于正 (PO．01)，而与初治组比较差异无显著性意义(PO．05)；AML各亚型患者 的表达与骨髓中白血病细胞比例呈正相关。将初诊AML患者按VEGF含量分 为2组，高于中位数水平的患者CR率为37％，平均CR持续时间为15周， 而低于中位数水平的患者CR率为79％，平均CR持续时间为29周，两组 间差异有显著性。在初诊时AML患者血清中的VEGF表达水平高者，经标准 方案化疗后，其CR率较低，平均CR持续时间较短。②初发AML患者骨髓 有差异，其它亚型间差异不显著。其它不同临床因素如性别、年龄、骨髓 中白血病细胞比例对P—gp水平没有明显影响。③P—gp表达与VEGF表达具