利福平抑制α-触共核蛋白聚集作用的实验研究.pdf

利福平抑制a．突触共核蛋白聚集作用的实验硝f究 中文摘要 利福平抑制Q．突触共核蛋白聚集作用的实验研究 专 业：神经病学 硕士生：徐杰 导 师：陶恩祥教授 摘 要 一．研究背景 帕金森病(Parkinson’Sdisease，PD)是一种常见于中老年人的中枢神经系统 变性疾病，主要病理改变为黑质一纹状体多巴胺能神经元进行性变性、死亡，同 时伴随残存神经元内出现嗜酸性包涵体(路易小体，Lewyd,体)，纹状体多巴胺 含量降低。a．突触共核蛋白(o—synuclein)聚集形成的不溶性纤维积聚物，是 构成路易小体(帕金森病主要病理特征)主要成份；并且随着对帕金森病的深入研 究，在其病因及发病机制方面己取得了很大的进展。越来越多的证据显示，可溶 节，是帕金森病各种诱发因素的共同通路。 研究表明，在基因突变及环境因素协同作用下，多巴胺能细胞内n—synuclein 发生错误折叠和聚集，导致细胞内多巴胺浓度提高，进而引起氧化应激反应。n —synuclein的聚集亦能影响泛素一蛋白酶体系统对其降解，进一步造成大量的。一 synuclein的聚集并形成细胞内包涵体，影u向细胞正常功能及代谢，从而引起细胞 死亡，导致帕金森病。 目前帕金森病新的治疗方法有外科手术、脑深部电极高频刺激、基因治疗、 神经干细胞移植等，但疗效均未有很大突破，大多数病人仍需药物治疗。外源性 左旋多巴是最有效的抗帕金森病药物，但只能控制症状而无法阻止疾病的进展， 利福平抑制“．突触共梭蛋白聚集作用的实验研究 中文摘要 并且长期使用左旋多巴会引起一些症状波动、运动障碍和精神异常等并发症，其 中尤其是开一关现象、异动症等并发症使患者及其家属产生畏惧感。因此，寻找 一种能够阻止疾病进展的药物，将为帕金森病的治疗带来新的希望。 利福平(rifampicin，RFP)是半合成利福霉素的衍生物，为广潜抗生紊，是 诺卡氏菌的发酵产物，在临床应用已久，为抗结核的主要药物之一。另可用于麻 风病治疗，并且随着药理学和药效学研究的深入开展，利福平的应用己越来越广 泛。 流行病学研究显示，服用抗麻风病药物利福平或氨苯砜几年的麻风病人，其 老年性痴呆的患病率明显减低，推测抗麻风药物可能有抑制口．淀粉样蛋白f口 -amyloid．AB)聚集的作用。并有大量研究表明利福平有抑制B淀粉样蛋白聚集 的作用，但具体的机制仍不清楚，推测利福平可能作为种自由基清除剂起作用。 由。一synuclein及其碎片聚集形成的病理性包涵体除存在于帕金森病外，还存在 于老年性痴呆患者的老年斑中，而且o．synuclein与13一淀粉样蛋白共同的结构特 点以及它们之间的相互作用，提示了帕金森病和老年性痴呆病理过程的相似性。 另据美国加州大学生化部的生化物理实验研究结果显示，抗生素利福平以浓度依 赖的形式抑制。一synuclein纤维形成，使其现有的纤维解聚。该研究的结果是令 人兴奋的，因为阻lE了。一synuclein的聚集，就有可能阻止帕金森病的进展，而 使已经聚集的a-synuclein纤维解聚，甚至有可能使疾病逆转。但目前围内外尚 未见到利用细胞和动物模型来验证这一结论。我们利用1一甲基--4--苯基一吡 平抑制a-synuclein聚集的作用，为进一步动物实验及其应用于帕金森病的临床 治疗提供初步实验依据。 二．研究目的 1．构建大量表达Q-synuclein并产生聚集的帕金森病细胞模型。 2．明确利福平对帕金森病细胞模型有保护作用。 3．探讨利福平具有抑制。一synuclein聚集的作用。 4．为进一步动物实验及应用于帕金森病的临床治疗提供依据。 利福平抑制叶突触共核蛋白聚集作用的实验研究 中文摘要 三．实验对象和方法 1．细胞株 PCI2：大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤细胞株。 2．细胞培养及药物处理 层培养细胞汇合以后，传代培养。将PCI2细胞传入96或6孔培养板中，待细 胞进入对数生长期后加药，加入不同剂量的利福平，利福平溶解于甲醇中，使终 以上剂量用于所有实验。 MPP+；(6)等体积甲醇MPP+组六组。 3．研究方法 (1