第六章固定化酶资料.ppt

第五节 固定化原生质体和辅酶的固定化 原生质体 辅酶固定化 方法 固定化要点 原因 方法 形式 第六节 固定化酶（细胞）的应用 固定化酶和细胞的应用（工农业、医药、分析化学、酶电极、亲和色谱、环境保护、能源开发、基础理论研究） 二．固定化酶（细胞）的应用 1. 固定化酶（细胞）在工农业生产上的应用 2． 固定化酶在医药治疗上的应用 3． 固定化酶在分析化学中应用 4． 固定化酶和亲和色谱 5． 固定化酶与环境保护 6． 新能源开发中的应用 7． 固定化酶在基础理论研究中应用 1． 固定化酶（细胞）在工农业生产上的应用 葡萄糖异构酶——世界上生产规模最大的一种固定化酶。 利用固定化乳糖酶可以连续生产低乳糖奶 固定化酵母细胞等微生物可用于生产各种酒类 热点：固定化原生质体的应用 2． 固定化酶在医药治疗上的应用 例1：固定化青霉素酰化酶，只要改变pH值等条件，就可以生成不同的产物。 青霉素酰化酶催化合成头孢类抗生素 7-ACA as nucleus 青霉素酰化酶催化合成头孢类抗生素 7-ACCA or 7-ADCA as nucleus 酶促合成头孢类抗生素 -- Reversible reaction -- Hydrolysis of substrate or product by biocatalyst -- Difficulty of separation of product from reactants + + Esterase Hydrolase Synthetase 固定化酶在医药治疗上的应用 例2：制造人工肾 利用固定化脲酶透析液和活性炭一起制成的体外循环装置，大大提高了疗效。 3．固定化酶在分析化学中应用 酶柱和酶管，可与分光光度计、荧光计或电量计结合，形成酶电极，进行某些物质的自动分析。 酶电极 特点：快速、方便、灵敏、精确 范围：糖类、抗生素、氨基酸、甾体化合物、有机酸、脂粉、醇类、胺类以及尿素、尿酸、硝酸、磷酸等 要求：酶必须有较强的专一性，并且要有一定的纯度。 研究新方向-微生物传感器 呼吸活性测定型： 电极活性测定型的微生物传感器 酶电极 4． 固定化酶和亲和色谱 亲和技术的基础：是生物活性化合物生物特异信息的综合。 利用了生命现象中生物分子间特有的高亲和力、高专一性，可逆结合而设计的纯化方法 唯一能够体现待分离物质间生物学功能差异的分离方法 5． 固定化酶与环境保护 一：环境监测 二：污染物处理。 6． 新能源开发中的应用 H2是重要的能源物质，虽然有许多微生物可以产生H2，但产氢系统不稳定。有人利用固定化丁酸梭菌连续产氢，稳定性比天然细胞好。 将植物的叶绿体中的铁氧还原蛋白氧化酶系统用胶原膜包被，可用于水的光介产生氢气和氧气 7． 固定化酶在基础理论研究中应用 阐明酶反应机理 揭示酶原激活机理 酶亚基性质的研究 研究蛋白质-核酸分子结构 连续的固定化酶柱进行DNA序列分析 原理：是测定DNA聚合时，以掺入dNTP同时释放的焦磷酸判断是否发生了聚合反应，进而确定掺入的是哪种核苷酸从而推导出序列 ——该系统由连续的6个固定化酶柱组成 焦磷酸酶、DNA聚合酶、甘油激酶、己糖激酶、ATP磷酸化酶，荧光酶柱 第六节结束 酶反应器 应用 分批搅拌反应器。 连续流搅拌桶反应器。 连续搅拌桶-超滤反应器 填充床反应器 循环反应器 流化床反应器 工农业生产上的应用 医药治疗上的应用 分析化学中应用 亲和色谱 环境保护 新能源开发中 基础理论研究 青霉素酰化酶 制造人工肾 酶电极 最适温度 一般与游离酶差不多，活化能也变化不大。 固定化酶作用的最适温度可能受到固定化方法和固定化载体的影响，在使用时要加以注意。有些固定化酶的最适温度与游离酶比较会有较明显的变化。 用重氮法制备的固定化胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶，其作用的最适温度比游离酶高5～10℃； 以共价结合法固定的色氨酸酶，其最适温度比游离酶高5～15℃。 同一种酶，在采用不同的方法或不同的载体进行固定化后，其最适温度也可能不同。 氨基酰化酶: 在用DEAE-葡聚糖凝胶经离子键结合法固定后，其最适温度(72℃)比游离酶的最适温度(60℃)提高了12℃； 用DEAE-纤维素固定化的，其最适温度比游离酶提高了7℃； 用烷基化法固定化的氨基酰化酶，其最适温度却比游离酶有所降低。 3、最适pH值 (1)载体带电性质对最适pH值的影响： 一般来说，用带负电荷的载体制备的固定化酶的最适pH值升高 用带正电荷载体制备的固定化酶的最适pH值降低 用不带电荷的载体制备的固定化酶的最适pH值一般不改变 (2)产物性质对最适pH值的影响： 一般来说，产物是酸性时固定化酶的最适pH值要偏高 产物为碱性时，固定化酶的最