第八章基因工程疫苗资料.pptVIP

* 目的蛋白被蛋白酶复合体降解成含有表位的抗原肽，可作为： ● “内源性抗原”：与MHCⅠ类分子结合，诱发CTL介导的细胞免疫应答。 ● “外源性抗原”：与MHCⅡ类分子结合，诱发偏向Th1型免疫应答。 四、核酸疫苗 * 目的蛋白亦可通过细胞分泌或细胞破裂的方式进入组织间，以天然折叠形式激活B淋巴细胞而产生抗体。 四、核酸疫苗 * DNA疫苗接种后，体内仅表达pg～ng水平的外源蛋白，但能诱发强而持久的细胞免疫和体液免疫应答。 如何解释这一现象呢？ 四、核酸疫苗 * 目的基因（含载体质粒）含有CpG基序的回文序列，能激活较强的CTL效应，并能激活巨噬细胞与NK细胞，因此，CpG回文序列被称为免疫刺激DNA序列。 CpG基序与IL-2、TNF-β、IFN-γ的基因结构相似而产生协同作用。 四、核酸疫苗 * 2、构建与免疫 ①目的基因的选择：侧重于免疫原性，即所表达的目的蛋白刺激机体免疫应答的能力。目的蛋白中是否具有受MHC分子限制的T细胞抗原表位，是保证核酸免疫有效的先决条件。 四、核酸疫苗 * 核酸疫苗所选择的目的基因应尽量避免有害基因成分，特别是病毒或肿瘤的核酸免疫。 四、核酸疫苗 * ②载体的选择：构建DNA疫苗的质粒通常是非复制型的真核表达质粒，能高水平地表达目的基因。 四、核酸疫苗 * 重组质粒可分为两个部分： ● 转录部分：由启动子、插入的目的抗原cDNA和poly A终止子组成，指导目的蛋白在体内表达，诱发特异性免疫应答。 ● 佐剂部分：CpG基序。 四、核酸疫苗 * ③启动子的选择：质粒在宿主细胞内表达外源性蛋白的水平与调控DNA表达的启动子关系密切。表达水平的不同又直接影响免疫应答的强度和持续性。 四、核酸疫苗 * ④DNA疫苗的优化 ● 联合构建：在载体质粒中插入2个或2个以上目的抗原基因，既能激活CD8＋T细胞产生特异性CTL，又能激活CD4＋Th2细胞产生体液免疫。  ● 协同构建：将目的基因与某种细胞因子的基因构建成嵌合基因，以促进目的基因的免疫效果。 四、核酸疫苗 * ⑤免疫途径、剂量、时间：常见免疫途径有肌肉注射、皮内或皮下免疫、粘膜免疫等。 四、核酸疫苗 * 3、核酸疫苗与传统疫苗的比较 传统免疫所使用的抗原一般是灭活病原体、减毒的活病原体或病原体的亚单位蛋白。 核酸疫苗仅仅是病原体某种抗原的基因片段，可提供与天然构象极为接近的目的蛋白，提呈给宿主免疫系统，与自然感染过程相似。 四、核酸疫苗 * 核酸疫苗兼有重组亚单位疫苗的安全性和减毒活疫苗诱导全方位免疫应答的高效力。 四、核酸疫苗 * 灭活疫苗和亚单位疫苗在体内代谢较快，难以长时间维持较稳定的含量，需多次接种免疫原，加强免疫。 核酸疫苗可在体内不断翻译表达，较长时间维持较高的蛋白水平，免疫具有连续性，一次接种可获得长期或终身免疫力。 四、核酸疫苗 * 采用不同毒株之间的保守DNA序列作核酸疫苗，可使其免疫作用突破地理株的限制，从而有效地预防病原体极易发生变异的某些疾病（如丙型肝炎、甲型流感、艾滋病等）。 四、核酸疫苗 * 核酸疫苗与世界卫生组织儿童计划免疫长远目标（用一种疫苗预防多种疾病）相吻合，不仅能预防疾病，还可作为治疗性疫苗，治疗一些复杂难治的疾病，如病毒性肝炎、癌症等。 四、核酸疫苗 * 五、蛋白工程疫苗（protein engineering vaccine ） 蛋白工程疫苗是指将抗原基因加以改造，使之发生点突变、插入、缺失、构型改变，甚至进行不同基因或部分结构域的人工组合，以期达到增强其产物的免疫原性，扩大反应谱，去除有害作用或副反应的一类疫苗。 * （二）遗传重组疫苗 （genetic recombinant vaccine） 遗传重组疫苗是指使用经遗传重组方法（genetic recombination）获得的重组微生物制成的疫苗。 通常是将对人体无致病性的弱毒株与强毒株（野毒株）混合感染，弱毒株与野毒株间发生基因组片段交换造成重组，然后使用特异方法筛选出对人体不致病的但又含有野毒株强免疫原性基因片段的重组毒株。 * （三）合成肽疫苗（Synthetic peptide vaccine） 合成肽疫苗是指使用化学方法合成能够诱发机体产生免疫保护的多肽制成的疫苗。 优点：①纯度和安全性高；②副作用小；③可