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微流控芯片系统糖调节蛋白(grp78)与肺癌耐药相关性研究中的应用
独创性声明
本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研
究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注
和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研
究成果,也不包含为获得大连医科大学或其他教育机构的学位
或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的
任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。
学位论文作者签名: 旺
签字日期: 兰丕 年—上月旦日
学位论文版权使用授权书
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留、使用学位论文的规定,同意大连医科大学保留并向国家有
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描等复制手段保存、汇编学位论文。
论文作者签名 虏巫
指导教师签名: 丝
签字目期:—么年』月里日
微流控芯片系统在糖调节蛋白(GRP78)
与肺癌耐药相关性研究中的应用
硕士研究生:王莺燕
指导教师:王琪教授
专业名称:内科学
摘 要
肺癌是全球性的恶性肿瘤,其发病率和死亡率在世界范围的肿瘤
性疾病中均居首位。化疗是肺癌的主要治疗方法,但是由于肺癌对很
多化疗药物产生耐受常常导致治疗失败。肺癌耐药机制比较复杂,一
般可分为内源性耐药和获得性耐药,除了与肿瘤基因类型有关外,还
与肿瘤细胞所处的微环境密切相关。因此,迫切需要探明肺癌耐药机
制,通过各种途径逆转其耐药性。
研究发现,肿瘤细胞在其所处微环境,即低糖、低氧、酸中毒的
条件下,能够诱导一组糖调节蛋白合成,这种蛋白可以和那些自身构
象改变的蛋白质相互作用,保证蛋白质进行适当的折叠并防止蛋白质
非特异性聚集,从而对抗应激,提高细胞对应激的耐受程度,维持细
胞的正常功能。
已有实验证实:糖调节蛋白在许多细胞抗凋亡机制中扮演重要角
色。关于标准细胞株GRP78的研究大多数集中于乳腺癌、结肠癌及卵
巢癌,对大细胞型肺癌细胞在这种条件下是否产生耐药国内外还未曾
有报道。
21世纪现代化学分析设备的发展趋势:微型化、集成化与便携化。
根据微流控芯片系统具有集成化、成本低、体积小、灵敏度高、检出
率高、试剂消耗少和检测时间短等优点,微流控芯片可能成为研究糖
调节蛋白与肺癌化疗耐药相关性一重要手段。
本研究采用NCI.H460肺癌细胞,利用微流控芯片平台观察在有
蛋白水平的表达。成功实现了在PDMS芯片上对NcI.H460细胞的培养
后,采用间接免疫荧光细胞化学的方法对蛋白进行检测。为了证实微
流控芯片系统的结果,同时采用传统方法在玻片上培养细胞,同样采
用间接免疫荧光细胞化学的方法对蛋白进行检测。结果:在488nm激
发光激发作用下,细胞核周均显示有绿色荧光。在A23187诱导下,荧
光强度均有明显增强,即糖调节蛋白78的表达明显升高。芯片平台在
此实验中体现了许多优点:一,在试剂消耗上,微流控芯片平台明显
低于玻片平台:微流控芯片平台:5.50斗l,玻片平台:50—60000“l。在
操作上,冲洗简便,大大简化了处理过程。二,PDMS芯片具有透明、
对气体(C02、02)高渗透性的特性,在免疫荧光的实验中显示了很好
的生物兼容性。三,在一张芯片上可同时完成对多个样本的检测。在
糖调节蛋白78和肺癌耐药相关性研究中,微流控芯片系统充分显示了
集成,高通量。试剂消耗少和操作简便的优点,证明微流控芯片系统
在此研究中的可行性。
对照组和实验组中均加入拓扑异构酶II抑制剂—ⅣP16诱导细胞
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