核酸提取和常见问题分析.pdf

核酸提取及常见问题分析  核酸提取及常见问题分析 TIANGEN BIOTECH(BEIJING)  CO., LTD. 讲座内容 p DNA提取及常见问题分析 p RNA提取及常见问题分析 DNA提取 DNA 提取 及常见问题分析  及常见问题分析 TIANGEN BIOTECH(BEIJING)  CO., LTD. DNA提取及常见问题分析 DNA 提取及常见问题分析 p DNA提取的原则 p DNA提取的方法 p DNA提取常见问题分析 DNA提取的原则 p 保证DNA一级结构的完整性 p 排除其它分子的污染 RNA、蛋白质、多糖等 DNA提取及常见问题分析 DNA 提取及常见问题分析 p DNA提取的原则 p DNA提取的方法 p DNA提取常见问题分析 DNA提取的方法 p基因组DNA的提取 l  CTAB法 l  SDS法 p质粒DNA的提取 l碱裂解法 l煮沸法 p线粒体、叶绿体DNA的提取 l差速离心结合SDS裂解法 基因组DNA提取主要方法 p CTAB法 适用于植物组织 ，真菌等 p SDS法 适用于动物组织 ，血液 ，细胞 ，细菌 ，酵母等 CTAB法(植物DNA提取经典法) p 原理 ÿ  CTAB （hexadecyltrimethylammonium  bromide，十六烷基三甲基溴化铵），是一种阳离 子去污剂，可溶解细胞膜，并与核酸形成复合物。 ÿ 该复合物在高盐溶液中（0.7mol/L NaCl）是可溶 的，通过有机溶剂抽提，去除蛋白、多糖、酚类等 杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。 注：CTAB溶液在低于15℃ 时会形成沉淀析出，因此在将其加入冰冷的 植物材料之前必须预热，且离心时温度不要低于15℃。 基因组DNA－ CTAB法 q  CTAB提取缓冲液的经典配方  Tris­HCl  EDTA  组份 NaCl  CTAB  β­巯基乙醇  （pH8.0） （pH8.0）  0.1% （V/V） 终浓度 100 mM  20 mM  1.4M  2%(W/V)  使用前加入  ÿ  Tris­HCl  （pH8.0）提供一个缓冲环境，防止核酸被破坏； 2+  2+  ÿ  EDTA螯合Mg  或Mn  离子，抑制DNase活性； ÿ  NaCl 提供一个高盐环境，使DNP充分溶解，存在于液相中； ÿ  CTAB溶解细胞膜，并结合核酸，使核酸便于分离； ÿ β­巯基乙醇是抗氧化剂，有效地防止酚氧化成醌，避免褐变，使酚容易去除 基因组DNA－ CTAB法 q  CTAB提取缓冲液的改进配方  Tris­HCl  EDTA  组份