猪瘟病毒e2基杆状病毒转移载体的构建及病毒诱导细胞凋亡的研究.pdfVIP

华中农业大学硕士研究生论文 摘 要 Fie and 猪繁殖与呼吸综合征(porci reprofluetiverespiratory 是由猪繁殖与呼吸综合征病毒引起的一种新的、高度传染性疾病，临床上以母猪发 热、厌食、早产、流产、木乃伊胎、死胎、弱仔等繁殖障碍及各种年龄猪的呼吸症 状和仔猪的高死亡率为特征。该病最早于1987年报道于美国南部，现已遍及世界 各地，给全球养猪业造成巨大的经济损失。猪伪狂犬病是由疱疹病毒科n疱疹病毒 亚科的伪狂犬病毒(PRV，亦称猪疱疹病毒I型)引起的一种急性传染病，在临床 上，主要引起母猪流产、死胎和产木乃伊胎等繁殖障碍，初生仔猪呕吐、拉稀、呼 吸困难、体温升高，15日龄内的仔猪死亡率几乎高达100％。近年来，全国各地很 多猪场都出现了以母猪繁殖障碍、仔猪呼吸困难为特征的传染病。为了弄清病因， 解决生产实际，特此开展了猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪伪狂犬病病毒的分离和鉴 定工作。 l猪繁殖与呼吸综合征病毒分离、鉴定 利用MARC一145细胞，从湖北、湖南、江西、河南、浙江等地发病仔猪和流产 胎儿的肺脏中分离到疑似PRRSV多株，并对其中一株病毒进行了全面的鉴定。该病 不耐酸碱，不能被5’-碘脱氧尿核苷(IUDR)所抑制。在电镜下，病毒粒予呈球形， 病毒、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪乙型脑炎病毒等的阳性血清中和。为了进 一步从分子生物学进行鉴定，设计了特异性引物对病毒的囊膜蛋白基因(ORF6)进 行了RT-PCR扩增，扩增到大小约为500bp的片段，与预期大小相当，而阴性对照则 不能扩增出相应大小的片段。根据以上结果，证实所分离的病毒为猪繁殖与呼吸综 合征病毒，并且属于美洲型，命名为PRRSVHA株。 根据GenBank上PRRSVVR-2332株的核苷酸序列，设计两对分别包含ORF5 HA株为模板，通过 和ORF7基因完整编码区的引物。以本实验室分离的PRRSV HA株ORF5 pMD．ORF5和pMD—ORF7，双脱氧末端终止法测序。结果显示PRRSV 该毒株的ORF5基因的核苷酸序列推导的氨基酸序列与上述3个毒株的同源性分别 猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪伪狂犬病毒分离、鉴定 是94％、94％、57％。这一结果也进一步证实了所分离的毒株为美洲型。 3猪伪狂犬病病毒的分离及初步的鉴定 从湖北宣城市某猪场流产胎儿的内脏组织中分离到一株PRV，并进行了初步的 PRV标准阳性血清中和；以PRV标准阳性血清为一抗，进行间接免疫荧光检测，在 荧光显微镜下可以观测到特异性的荧光反应。进一步利用特异性引物以所分离病毒 的DNA为模板，扩增PRV gD基因，扩增到大小217bp的片段，与PRV鄂A株为 模板扩增的gD基因片段大小一致。通过这些实验证实所分离的病毒为PRV，命名 为PRv YC株病毒液，经腹腔接种昆明小 YC株。用TCID50为104”／0．1ml的PRV 鼠3只，每只O．2ml，3-5天后，所有小鼠死亡，而对照组2只的小鼠没有任何反应。 说明所分离病毒对小鼠的毒力较强。 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒；0RF5和0RF7基因；克隆；序列分析； 猪伪狂犬病病毒；分离；鉴定 2 华中农业大学硕士研究生论文 Abstract Porcine and anewand reproductive respiratory syndrome(PRRS)