肠易激综合征患血清anti-hu抗体检测及其临床意义.pdf

目 录 第一部分：HuD蛋白的表达、纯化与鉴定 中文摘要…………………………………．．．………………………………………………。3 英文摘要……………………………………………………………………………………4 前言………………………………………………………………………………………………………．S 实验材料与方法……………………………………………………………………………7 结果………………………………………………………………………………………………………………………。16 讨论………………………………………………………………………………………………………………………．．22 结论……………………．…………………………………………………………………………………………………．：!zl 参考文献……………………………………………………………………………………25 第二部分：肠易激综合征患者血清anti．Hu抗体检测及其临床意义 中文摘要……………………………………………………………………………………29 英文摘要……………………………………………………………………………………30 前言……………………………………………………………………………………………………………………31 实验材料与方法……………………………………………………………………………33 结果………………………………………………………………………………………………………………………．38 讨论………………………………………………………………………………………………………………………．．4S l右论…………………………．……………………………………………………………………………………………．47 参考文献…………………………………………………………………………………48 综i苤…………………………………………………………………………………………………．……………………．51 英汉名词对照………………………………………………………………………………61 志{射………………………………………………………………………………………………………………………．63 第一部分 HuD蛋白的表达、纯化与鉴定 Iden饰ca60n and Pn)te衲HuD：Expn器sion，Pun6ca舶n 2 中文摘要 背景 HuD蛋白为ELAV家族的重要成员，特异性分布于神经组织中。它通过结 合神经元内特异表达的mIⅢA3’UTRAl也元件，稳定mRNA并提高其翻译效率， 对神经元的生长、发育、分化中有重要作用。现已证实，HuD的低表达与视神 经发育障碍、先天性巨结肠等疾病相关，其多克隆抗体觚ti．Hu抗体在副肿瘤综 合征、假性肠梗阻等多种疾病的发病机制中扮演一定角色。表达并纯化HuD蛋 白，对研究其生物功能以及了解anti．Hu抗体在疾病中的作用有重要意义。 目的 构建携带GST标签的小鼠HuD蛋白重组表达质粒，通过原核表达系统表达， 并进行纯化、鉴定。 方法 从小鼠脑组织中提取总mIⅢA，使用分子克隆技术RT_PCR特异扩增HuD 用EcD，fBL．21(DE3)原核表达系统表达小鼠HuD蛋白全长，亲和层析纯化后 PreScissionTM蛋白酶切除GST标签，通过免疫印迹技术进行鉴定。 结果 获得了纯化的小鼠GST-HuD融合蛋白及小鼠HuD蛋白，经鉴定其抗原表位 具有生物免疫活性。 结论 具备生物免疫活性，可用于anti．Hu抗体的制备及HuD蛋白生物功能的研究。 关键词 HuD；质粒载体；原核表达系统；GsT融合蛋白；副肿瘤综合征 3 一————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————一