tnfrⅱ转基诱导喉鳞癌裸鼠模型中肿瘤细胞凋亡的实验研究.pdf

中文摘要 TNFRⅡ转基因诱导喉鳞癌裸鼠模型中 肿瘤细胞凋亡的实验研究 摘 要 目的：确立应用n师RII转基因结合n盯a局部应用杀 伤喉鳞状细胞癌的各种条件和方法，为喉鳞癌的基因治疗开 辟新途径。 方法：l、从大肠杆菌中按试剂盒步骤提取质粒备用2、 喉鳞癌裸鼠模型的建立选择Balb／c纯系裸鼠110只，鼠龄 3-4周龄，体重12．189，均为雌性，实验组于背部皮下注入 空气层流架中，恒温恒湿，灭菌处理的饲料和水，供自由食 用。当肿瘤长至8-10mm时，用于实验。3、活体转基因3．1 转染不同剂量TNFRlI观察在相同时间的表达水平，确定 TNFRⅡ的较佳转染剂量：取瘤体最大直径为8-10mm的裸 组、25ug组，每组5只，对照组注入空质粒100ul，(转染组 48h将实验鼠脱颈处死后，取出瘤组织部分放入4％甲醛中 固定，常规石蜡包埋。部分放入70％的酒精中固定。3．2以 转染较佳剂量的TNFRlI转染后观察转染后不同时间的 为转染组和未转染组，每组各5只，转染组以脂质体与DNA 84h，将实验鼠脱颈处死后取出瘤组织，未转染组注入空质 中文摘要 TNF 粒1009l，在较佳的转染时间将鼠处死取出瘤组织。4 n局部注射：将肿瘤长至10mm的裸鼠选择成瘤较好的45 只随机分为转染组和未转染组，转染组又分为治疗组和对照 组，治疗组每组9只。对照组生理盐水组(6只)：注入生 次，治疗期36天，治疗期间每三日测鼠重，量瘤体最大长 径及最大垂直径，注入最后一次TNFct或生理盐水24h后将 实验鼠脱颈处死。 弥散，6只未长瘤，4只死亡，2只注入PBS未成瘤，成瘤 率94．5％，将鼠处死后做病理示鳞状细胞癌。2、注入TNFR II Wall,sTest， mean 11．068 25 J．tg与空质粒有显著性差异，1陷与空质粒组无统计学差异， 经KruskalwallisTest，mean 13．673 12．33(Chi．square 2599组可见大量表达，膜呈网状的深褐色，胞浆、胞核不着 中文摘要 色。4、转基因组中的瘤体积表现为瘤体积渐增大，但增加 P=0．049)，且 的幅度不同，各组间有显著差异(F=2．497 10000u组抑瘤效果较强，瘤体积最小，两两比较与对照组生 理盐水组间无统计学差异，转基因组与空质粒组间的瘤体积 变化亦无统计学差异。而在瘤重、瘤／鼠重及抑瘤率三项观察 指标中无论是转基因组中各剂量组与生理盐水组，转基因组 与空质粒组之间，均在统计学上有显著差异，且最佳剂量为 2000u组。5、流式细胞术测定凋亡率及细胞周期的变化转 基因组与生理盐水组之间的凋亡率在统计学上有显著差异， (F=2．917 佳，与空质粒组相比亦有统计学意义(F=5．758P=-0．037)说 10000u 明转染后促凋亡效果增强。在光镜下可见2000u 量的坏死细胞。空质粒和500u有少量凋亡细胞，较弥散。 生理盐水组个别细胞可见凋亡。电镜下见2000u组、10000u、 25000u组核膜呈锐角突起，核染色质浓缩，电子密度增加边 集于核模下，有的形成半月。线粒体空泡化明显，粗面内质 网脱颗粒。但25000u组坏死组织较多。生理盐水组细胞呈 椭圆形，细胞质丰富，核椭圆形略不整形，常染色质丰富， 异染色质少，有大而明显的核仁，线粒体轻度空化，粗面内 质网轻度脱颗粒。500u组有变性坏死为细胞核的碎片。线位 体局部水肿，空泡化，部分和大部分嵴融合、消失，部分和 大部分膜消失。空质粒组(n吓a2000u)细胞局部