ⅰ型人类免疫缺病毒蛋白r（hiv-1vpr）对胶质瘤作用的体外研究.pdf

摘要 摘要 Vpr)对人U25l和大鼠C6胶质 目的：探讨l型人类免疫缺陷病毒蛋白R(HIV一1 瘤细胞的增殖和凋亡的影响。 方法：1．构建并鉴定含有HIV-1 vpr基因的真核表达载体puB6／vpr。2．采用脂 vpr的mRNA在两种细胞中的表达。测定MTT光密度值以观察转染后细胞的增 殖活性的变化，细胞计数计算细胞生长抑制率，流式细胞仪检测转染后细胞的 凋亡状态和细胞周期的改变。 结果： 1．成功构建Ⅲv_1vpr基因的真核表达载体puB6／vpr。 2． 利用脂质体介导puB6Ⅳpr转染至胶质瘤细胞系u251和C6中，24小 mRNA的 时后提取细胞的RNA进行RT-PcR，可检测到在两种细胞中均有vpr 表达。 和c6细胞增殖能力受到抑制，MTT吸收值在转染后24小时、48小时和72小 时均下降，与不含Hlv_1 vpr基因的空载体puB6／v5．HisA组相比，有统计学意 小时的生长抑制率为18．5％，c6细胞在puB6／vp『转染后36小时的生长抑制率 puB6／v5．HisA对照组。④光镜下发现puB6／vpr转染u251细胞一定时问后细 胞出现凋亡表现，流式细胞仪检测显示转染puB6／Vpr后的u251细胞与 DuB6／v5．HisA组相比，在转染后24小时早期凋亡率增多，并且在48和72小 时晚期凋亡率和／或死亡率增多。 结论：Hlv-1vDr能够抑制胶质瘤细胞系u251和c6的增殖活性，诱导细胞周期 停滞于G2／M期，并能促进细胞的凋亡。 关键词：l型人类免疫缺陷病毒蛋白R(HIv．】vpr)：胶质瘤；转染；增殖；凋亡 Abstract AbStraCt thee仟ectof onthe and ofthe 0bjectiVe：TojnVestigate Vpr proliferationapoptosis human celllinesU251andtherat celllinesC6． astrocytoma glioma Methods：1．A which theH11V-1 eucaryoticexpressionplasmidpUB6／Vprexpresses wasconstructedandidentified．2．The wastransfectedinto Vpr pUB6，Vprplasmid rat theU251human ceUlinesandC6 celllines astrOcytoma glioma byliposOme then mRNA of in cell mediated the thesetwOtransfected method，and Vpr expression wasdetectedR，r-PCR．TheMTT0DValuesofthetransfectedceUlineswere lines by measuredfortheir actiVit theinh