组织工程窦房结外构建初探.pdf

组织工程窦房结体外构建初探 摘 要 目的：对乳猪窦房结的所在部位进行准确的定位，建立一套可靠的窦 房结细胞取材、分离、纯化培养技术。在成功培养乳猪窦房结细胞的基础 上选取窦房结细胞作为种子细胞，以胶原纤维膜为支架材料进行复合培养， 在体外构建组织工程窦房结的雏形。方法：(1)窦房结细胞的取材：取出 消毒胸腹部皮肤、沿胸骨正中切开皮肤，剪开胸骨，并用乳突牵开器牵开， 再用眼科剪分离心包膜、胸腺，暴露整个心脏至上腔静脉。轻牵移右心耳， 看清上腔静脉，用多导电生理记录仪的2根双极电极在窦房结区域f上腔 静脉与右心房交界处周围)用蛙跳方式反复标测记录电活动，寻找房波最 早出现的位置。在该位置插入银针一枚，取下整个心脏，然后在解剖显微 (o．01mmol／L)中。将所取乳猪的窦房结组织进行原代细胞培养，随机分两 组：常规方法培养和纯化培养。犯)心房肌细胞的取材：在解剖显微镜下， (3)窦房结细胞纯化培养：将组织块用PBS液洗 PBS(0．01mmol／L)中。 一支离心管中，加等体积含20％胎牛』fn清的DMEM培养基终止胰酶消化。 重复消化5次至组织块基本消化成单细胞为止；将收集的细胞悬液离心 次