【编辑推荐】高考生物 实验的染色与颜色观察课件.pptVIP

高中生物实验的染色与颜色观察 染色剂的染色与显微镜的观察 显微镜观察的是透射光而不是反射光，所以对于大部分无色半透明的生物组织细胞结构来说，需用特殊的方法制片染色处理后才能用显微镜观察清楚。而且生物材料很少是单层细胞结构的，故还需要进行切片或压片、涂片等处理操作。 如果观察经过染色剂染色的生物材料，如观察洋葱根尖分生区有丝分裂实验时要用较强的光照。而不经染色的生物材料在显微镜下观察时，光线尽可能的较暗些。如观察质壁分离与复原实验时，如果光线太强，不容易观察到液泡。 碱性染料与染色体的观察 生物实验中所用的染料，按其来源可分为天然染料和人工染料两大类。人工染料根据其主要化学成分的性质，又分成碱性染料、酸性染料和中性染料三大类，其碱性、酸性和中性是由染料中有色部分的性质所决定的。若染料的有色部分为阴离子，即为“酸性”染料；若染料的有色部分为阳离子，则称为“碱性”染料；若染料的阴、阳离子均有颜色，则称为“中性”染料。染色体(质)是细胞核内容易被碱性染料染成深色的物质。 在观察植物细胞有丝分裂实验中，常用龙胆紫溶液使染色体染成紫色，也使用醋酸洋红溶液使染色体着红色。二者染色时间都不可过长。 １％～ ２％龙胆紫溶液俗称紫药水，是人们所熟悉的外用药。龙胆紫溶液的配制是将龙胆紫溶解在质量分数为2％的醋酸溶液中配制而成。染色中使用的龙胆紫溶液略呈酸性， l％醋酸洋红本身也是酸性，同样具有碱性的助色基团。 配方中的醋酸是染料的溶剂，在染色时增加了细胞的通透性，利于染液的离子进入细胞而使细胞核内的染色体着色 。 此外，改良苯酚品红溶液也可使染色体着色。 应用：用高倍镜观察细胞的有丝分裂等。 DNA和RNA的染色鉴定 甲基绿和吡罗红是混合染色剂。 甲基绿是具有金属光泽的绿色微结晶或亮绿色粉末 。溶于水 ，显蓝绿色。稍溶于乙醇，不溶于戊醇 。吡咯在盐酸作用下聚合成为吡罗红，可与 RNA结合呈现红色。 这两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同，甲基绿使DNA呈现绿色，吡罗红使RNA呈现红色。利用甲基绿、吡罗红混合染色剂将细胞染色，可以观察到DNA和RNA在细胞中的分布情况。 注意：①盐酸能改变细胞膜的通透性，加速染色剂进人细胞，同时使染色体中的DNA与蛋白质分离，有利于DNA与染色剂结合。② 2种染色剂要混合使用，而且要现配现用。 活体染色剂健那绿和亚甲基蓝 健那绿染液是专一性的线粒体的活细胞染料，线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态( 即有色状态)呈蓝绿色 ， 而在周围的细胞质中染料被还原成为无色状态 。 因此可以使活细胞中的线粒体呈现蓝绿色，而细胞质接近无色。 线粒体能在健那绿染液中维持活性数小时，通过染色，可以在高倍显微镜下观察到生活状态的线粒体的形态和分布。 亚甲基蓝是细胞的活体染色剂，0.01％亚甲基蓝对细胞无毒害，亚甲基蓝是一种有机物小分子，在水中离解成亚甲基蓝的阳离子(呈蓝色)和氯离子(无色)，亚甲基蓝阳离子可通过主动运输进入到细菌体内，在酶的作用下被细菌分解成无色的小分子，使蓝色褪去。褪色程度越大，说明细菌越多，水污染越严重，因此可用于水污染程度指示剂。此外，亚甲基蓝是氧化还原指示剂，在有氧的环境中蓝色褪去 ，可用作氧气检测剂。 台盼蓝使死细胞染成蓝色 原理：正常的活细胞，细胞膜结构完整具有选择透过性能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内;死细胞或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。 应用：区分活细胞和死细胞;检测细胞膜的完整性。 另有用红墨水鉴定种子发芽率实验同理。 苏丹红与脂肪鉴定 苏丹 Ⅲ、 苏丹Ⅳ是人工合成的苏丹红系列染料 。常作为一种工业染料 ，被广泛用于如溶剂 、油 、蜡 、汽油的增色以及鞋 、地板等增光。近年有不法分子用于食品添加剂，对人体有害。 苏丹红为亲脂性化合物。在脂肪类物质中的溶解度大于在其他溶剂( 如酒精 、丙酮) 中的溶解度时 ，染料颗粒便大量进入脂肪类物质的结构内 ，在脂滴中溶解积累 ， 并吸附在脂肪颗粒结构上 ，苏丹Ⅲ遇脂肪显橘黄色，苏丹Ⅳ遇脂肪显红色。苏丹Ⅳ染液与脂肪的亲和力比较强，所以染色时间应比苏丹Ⅲ短。 斐林试剂检测可溶性还原糖 原理：还原糖 + 斐林试剂（加热后） → 砖红色沉淀 注意：斐林试剂的甲液和乙液要等量混合均匀后方可使用，而且是现用现配，条件需要水浴加热。 应用：检验和检测某糖是否为还原糖;不同生物组织中含糖量高低的测定;在医学上进行疾病的诊断，如糖尿病、肾炎。 菲林试剂与双缩尿试剂的比较 DNA的染色与鉴定 染色原理：DNA+甲基绿→绿色 应用：可以显示DNA在细胞中的分布。 鉴定原理：DNA+二苯胺→蓝色 应用：用于DNA粗提取实验的鉴定试剂。 一些化学物质的检验方法 吲哚酚试剂与维生素C溶液呈褪色反应 原理：吲哚酚即2