蛋白质的通性纯化和表征解析.pptVIP

第3章 蛋白质的通性、纯化和表征 一、?蛋白质的酸碱性质和等电点 二、?蛋白质的胶体性质与蛋白质的沉淀 蛋白质分子直径在1-100nm之间，在水溶液中具有胶体溶液的通性。 1、?稳定蛋白质胶体溶液的主要因素： ①蛋白质表面极性基团形成的水化膜将蛋白质颗粒彼此隔开，不会互相碰撞凝聚而沉淀； ②两性电解质非等电状态时，带同种电荷，构成稳定的双电层，互相排斥不致聚集沉淀。 2、??沉淀蛋白质的方法 ①盐析法: 大量的中性盐（（NH4）2SO4、Na2SO4、NaCl），使蛋白质脱去水化层而聚集沉淀；不引起变性。 ②有机溶剂沉淀法： 破坏水化膜，降低介电常数，丙酮、乙醇等； ③重金属盐沉淀：pH＞pI时，蛋白质颗粒带负电荷，与重金属离子（Hg2+. Pb2+. Cu2+ 等）结成不溶性沉淀； ④生物碱试剂和某些酸类沉淀法：pH小于pI时，蛋白质带正电荷，易与生物碱试剂和酸类的负离子生成不溶性沉淀。生物碱试剂：单宁酸、苦味酸、钨酸。酸类：三氯乙酸、磺基水杨酸； ⑤加热变性沉淀法。 三、蛋白质分离纯化的一般原则 纯化的实质：增加制品的纯度或比活性 一般程序：前处理、粗分级分离、细分级分离、结晶保存 1、前处理（pretreatment）： ①将组织和细胞破碎 动物组织和细胞：电动捣碎机 、匀浆器、超声波处理； 植物组织和细胞：石英砂+提取液研磨或用纤维素酶处理； 细菌：超声波震荡、与