超氧化物歧化酶(SOD)课件.pptVIP

微生物发酵生产超氧化物歧化酶 　　超氧化物歧化酶（SOD）是生物体内一种重要的抗氧化酶，由于其具有清除生物体内超氧阴离子自由基的作用，而引起广大学者的关注。微生物发酵生产SOD的工艺是目前生产SOD的最主要手段，今天就SOD的发现、功能以及发展史作了一个简单的介绍，并着重从微生物发酵生产SOD的方向，对几种SOD高产菌株的选育方法、筛选方法、优化工艺等进行了综述，并对其应用前景进行了展望。 超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase，SOD)是一种生物体防御氧化损伤的、对机体具有显著保护作用的生物酶，它广泛分布于动物、植物与微生物体内。由于SOD具有清除体内O2-的能力，且能较好地抵御氧自由基和基他氧化物自由基对细胞质膜的毒性，维持细胞正常的生理代谢，所以其在机体保护方面起着重要作用，也因此SOD被广泛应用于医药、食品和化妆品工业，作为抗衰老、抗炎症、治疗自身免疫疾病的药品以及食品、化妆品的添加剂等，被专家称为21世纪最有前途的药用酶。 　　 　 目前，SOD的生产主要是从动物血液或肝脏中提取，资源不仅有限而且容易造成污染。鉴于动物血液来源困难，而微生物则具有可以大规模培养的优势，近几年来不少学者积极探索用微生物发酵生产SOD。本文主要针对几种SOD高产菌株发酵生产SOD的原理、方法、工艺流程及优化的研究进展作一个综述。 从SOD的发现到其命名，期间经历了三十多年的时间，最初的发现是在1938年，Mann和Keilin从牛红细胞中分离提取出一种含Cu的血铜蛋白；1953年Keilin又从小牛肝、鲸肝中分离出肝铜蛋白；1968年McCord和Fridovich根据血铜蛋白、肝铜蛋白、脑铜蛋白皆有O2- 歧化活性，才将此酶命名为超氧化物歧化酶。但那时，他们的研究大多集中于从动物血液或脏器中提取SOD，容易受原料来源、产品得率、稳定性及安全性等方面的限制。 　　　 直到上世纪8O年代后，美国和日本才先后开发了用发酵法生产SOD，利用微生物具有原料便宜易得，可大规模生产的优势大大降低了生产成本。目前，国内外都致力于微生物生产SOD的研究，并且在菌种选育、发酵工艺、分离提纯、生理学研究、基因克隆表达及SOD应用等方面都取得了一定的研究进展。 SOD类型：超氧化物歧化酶按其所含金属辅基不同可分为三种： 第一种是含铜（Cu）锌（Zn）金属辅基的称（Cu.Zn—SOD），最为常见的一种酶，呈绿色，主要存在于机体细胞浆中； 第二种是含锰（Mn）金属辅基的称（Mn—SOD），呈紫色，存在于真核细胞的线粒体和原核细胞内； 第三种是含铁（Fe）金属辅基的称（Fe—SOD），呈黄褐色，存在于原核细胞中。 从众多研究者的研究中我们可以得出，微生物类群SOD含量的基本规律是：革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的SOD含量没有明显差异，放线菌和细菌的SOD 含量没有明显的差异，真核微生物的SOD含量一般高于原核微生物，好氧微生物的SOD 含量显著高于厌氧微生物。 鉴于SOD在微生物中的含量的分布，常用以下七种SOD高产菌株进行研究。 3.1普通酵母菌 3.2啤酒废酵母 3.3霉菌 3.4云芝菌丝体 3.5枯草芽孢杆菌 3.6大肠杆菌 3.7乳酸菌 啤酒废酵母菌提取的经济价值 啤酒废酵母是啤酒生产重要的副产物．其产量为啤酒产量的0．2％～0．3％(干基，质量分数)。我国啤酒年产量已达3200万千升，将有～96万t的啤酒废酵母产生。目前啤酒厂除将小部分酵母泥留作种子使用外，大部分连同其中的残留啤酒直接排入下水道，严重污染环境(酵母泥的生物耗氧量、化学耗氧量均高达l0万mg/L以上) ；或者是加工成附加值较低的一些产品。 实际上，啤酒酵母含有许多营养成分，且无毒，这是一巨大的宝贵资源，研究酵母中生物活性物质。合理开发利用啤酒废酵母，将产生良好的经济效益和社会效益。 在啤酒废酵母中SOD的含量较高， 研究利用啤酒酵母生产SOD的生产工艺，所得SOD粗酶液的收率可达到73％。 　菌株的培育：通过将啤酒废酵母洗涤、分离、漂洗预处理后，再将其接种至酵母培养基中培养进行复壮，最终以异丙醇破壁提取法提取酵母中的SOD，并用丙醇溶液对所提SOD进行两次纯化。此方法不仅有较高的SOD产率，且所提SOD有较高的酶活力。 　　　　 酵母泥 洗涤 酵母培养基 灭菌 酵母菌复壮 SOD纯化 SOD提取 啤酒酵母的预处理 酵母的复壮培养 酵母SOD的提取 SOD纯化 丙酮分级沉淀操作时，宜在4～10℃条件下进行，有利于提