第九章基因突变解析.pptVIP

第九章 基因突变 第一节 寡核苷酸介导的基因突变 第二节 盒式突变法 第三节 利用PCR进行DNA序列的突变 第四节 随机突变 基因突变是研究基因表达调控和蛋白质的结构功能 的重要方法 位点特异性突变 寡核苷酸介导的基因突变；盒式突变；PCR 随机突变 第一节 寡核苷酸介导的基因突变 步骤： （1）正链DNA的合成 （2）突变引物的合成 17-19个 ①特异性 ②避免自身的二级结构 ③位置尽量在中间 （3）异源双链DNA分子的制备 （4）转染 （5）突变体的筛选 （6）突变体的鉴定（测序） 1、Kunkel突变法 dUTP→ dUMP dUTP酶 dut- dUTP库↑ 尿嘧啶N糖基化酶 ung- 胸腺嘧啶残基被尿嘧啶所取代 利用Kunkel法，以M13噬菌体DNA为载体进行 寡核苷酸介导的位点特异性突变 2、硫代磷酸寡核苷酸介导的突变 某些限制性内切酶不能水解硫代磷酸（酯）核苷酸间连键 硫代磷酸寡核苷酸介导的突变 第二节 盒式突变法 第三节 利用PCR进行DNA序列的突变 1、在基因的5’或3’末端产生突变 2、重叠延伸和基因突变 （1）取代突变 （2）插入突变 （3）缺失突变 3、产生分子嵌合体