第二章基因工程概论解析.ppt

RF DNA M13噬菌体 （二） M13噬菌体性质 ①在IS区内插入LacZ基因 ②在标记基因区内组装MCS区段 柯斯质粒 ※柯斯质粒载体，又称粘粒、柯斯载体，是一类人工构建的含有λDNA的cos序列和质粒复制子的特殊类型的质粒载体，cosmid是cos site carrying plasmid的缩写。 柯斯质粒pHC79 　系由质粒pBR322和噬菌体λ的cos位点的一段DNA构成全长4.3kb Cosmid载体的特点 　①具有λ噬菌体的特性 　②具有质粒载体的特性 　③高容量的克隆能力 采用柯斯质粒作载体的不足 ①载体自身只相当于可以插入片段的1/10左右，因此往往会出现载体同载体自身连接，结果在一个重组分子内可有几个柯斯质粒载体连在一起。 采用柯斯质粒作载体的不足 ②大小不等的外源片段相互连接后插入同一个载体分子，结果使在基因组内本来不是相邻的片段错乱地连接成一个片段，会影响实验结果的分析 采用柯斯质粒作载体的不足 ③细菌的菌落体积远大于噬菌斑，因此如用柯斯质粒制备基因文库，则筛选所需的含某一DNA片段的菌落很费时间。 第四节　人工染色体克隆载体 ※人工染色体指人工构建的含有天然染色体基本功能单位的载体系统。 温和性病毒： 溶原性增殖→构建病毒载体 烈性病毒： 溶菌性增殖→改造后构建病毒载体 酵母人工染色体（YAC） 酵母人工染色体（YAC)是人工染