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正交设计川木通中药学论文 【摘要】目的确定川木通RAPD-PCR反应各因素的最佳水平，最终确定RAPD-PCR反应的最佳反应条件。方法采用正交设计L16（45）在4个水平上对川木通类植物进行RAPD-PCR进行试验。两次结果分别用统计软件MINITAB进行分析。结果最终确定RAPD-PCR反应的最佳反应条件为：20μl体系，其中含1×CRbuffer,2.5mmol/LMgCl2,0.15mmol/LdNTPs,1.0UTaq酶，0.5μmol/L10-mer引物，50ng模板DNA，最终确定退火温度36。同时发现Taq酶对反应体系影响最大。结论建立了可靠的反应体系，为该类药材的分子鉴定奠定了基础。 【关键词】正交设计；川木通；RAPD-PCR 川木通类药材均来自于毛茛科铁线链属植物，该属植物我国共分布有108个种［1］，有些铁线莲属药用植物外形极为相似，有时非花期植株难以鉴别，经过药材加工后更加难以辨别，容易在应用中造成品种混乱，影响临床用药安全与疗效。因此，在具体开发使用本属药用植物资源时，应重视和加强对其品种的鉴定，以确保资源的正确合理使用。RAPD继承了PCR技术效率高，样品用量少（只需少量DNA样品），灵敏度高，检测容易等优点［2］，目前被广泛地应用于药用植物的分类鉴定工作。但PCR各因素水平对反应结果均有影响。目前关于川木通RAPD-PCR的反应