常用分子生物学试剂的选择中文讲解.pptVIP

常用分子生物学试剂的选择 赵秋伟 限制性核酸内切酶 II 型限制性核酸内切酶的基本特性 星号活性 在非标准反应条件下,也能切割一些与其特异识别序列类似的序列。在酶的名称右上角加一个星号(*)表示,如EcoRⅠ*。 必须采用规范的实验步骤,坚持应用推荐的反应条件。 DNA连接酶 * 用于核酸操作的工具酶 限制性核酸内切酶 DNA连接酶 DNA聚合酶 核酸酶 核酸修饰酶 如何选择最合适的限制性内切酶 限制性核酸内切酶的生物功能 影响限制性核酸内切酶活性的因素 限制性核酸内切酶 限制性核酸内切酶的生物功能 主要存在于原核细菌中，帮助细菌限制外来DNA的入侵 识别双链DNA分子中的特定序列，并切割DNA双链 细菌的限制与修饰作用 hsd R：编码限制性核酸内切酶 hsd M：编码限制性甲基化酶 hsd S：编码限制性酶和甲基化酶的协同表达 主要特性 I 型 II 型 III 型 限制修饰 蛋白结构 辅助因子 识别序列 切割位点 异源三聚体 多功能 同源二聚体 异源二聚体 距识别序列1kb处 随机性切割 旋转对称序列 TGAN8TGCT AACN6GTGC 距识别序列下游 24-26bp处 识别序列内或附近 特异性切割 GAGCC 限制性核酸内切酶的类