固相萃取小柱终极版资料.ppt

报告人：武霓 固相萃取技术 固相萃取简介 固相萃取（Solid Phase Extraction，简称SPE），是一种样品前处理方法，由液固萃取和柱液相色谱技术相结合发展而来。 SPE 自20世纪70年代出现以来，一直以 10%的年增长率扩大其应用。 与传统的液-液萃取相比较，SPE具有简便、低耗、高效等优点。 固相萃取的用途 富集：用于痕量分析； 如对饮用水中有毒有害物质的分析 净化：去除样品中对仪器和分析物有干扰的成分 转换溶剂：一些分析仪器对样品溶液的溶剂有特殊 要求，可以通过SPE柱进行转换 如采用气相色谱法检测水中污染物 固相萃取柱的结构 固相吸附剂 固相萃取的原理 当复杂的样品溶液通过吸附剂时，由于吸附剂与目标化合物之间的作用力较强，目标化合物被保留在SPE柱上，其他组分则透过吸附剂流出小柱。 然后再用一种与目标化合物的作用强于吸附剂的溶剂选择性的将目标化合物洗脱下来，从而实现对复杂样品的分离、纯化和富集。 固相萃取基本操作步骤 两种模式： 目标化合物吸附模式、杂质吸附模式 四个步骤： 活化：使SPE柱上的活性基团伸展 上样：注意控制样品流速 淋洗：将柱上保留能力较弱的杂质洗掉 洗脱：选择性的洗脱目标化合物，而将保留 能力强的杂质留在柱上 固相萃取的作用力 非极性作用力（反相吸附） C-H键间的作用力，属范德华力，作用力较弱 极性作用力（正相吸附） 氢键、偶极距、π-π间的相互作用力，作用力大于范德华力但小于离子作用力 离子作用力（离子吸附） 带电荷的目标化合物与带相反电荷的吸附剂之间的库伦力，作用力较大 固相萃取柱的分类 反相柱（非极性作用） 如C18、C8、C2、PS、PEP等 吸附剂：非极性或弱极性基团 目标化合物：非极性至中等极性化合物 样品溶液：水或含少量甲醇的水溶液 特点：选择性较差。可从水中吸附目标化合物，如用于 蛋白质除盐。 固相萃取柱的分类 反相柱通用操作流程 活化/平衡：甲醇活化，纯水或样品溶剂平衡 上样：样品溶液 淋洗：纯水、甲醇水溶液或样品溶液淋洗 洗脱：含适量有机溶剂的水溶液、甲醇或极性更低的有 机溶剂 溶剂体系极性：样品溶剂>淋洗溶剂>洗脱溶剂 固相萃取柱的分类 正相柱（极性作用） 如NH2、Florisil、Silica、PSA等 吸附剂：强极性基团 目标化合物：中等极性到强极性 样品溶液：非极性至中等极性 固相萃取柱的分类 正相柱通用操作流程 活化/平衡：正己烷或样品溶剂活化平衡 上样：样品溶液 淋洗：正己烷、含适量中强极性有机溶剂的正己烷或样 品溶液淋洗 洗脱：含适量中强极性有机溶剂的正己烷溶液或中强极 性有机溶剂 溶剂体系极性：样品溶剂<淋洗溶剂<洗脱溶剂 固相萃取柱的分类 离子交换柱：阳离子交换柱、阴离子交换柱 使用的条件 环境的 pH 必须使分析物和吸附剂带相反电荷 环境不能含有高浓度带有和分析物相同电荷的竞争物 HA=H++A- pH=pKa+log(A-/HA) 上样时，为使该化合物99%离子化，样品基质的pH应高于该化合物的pKa至少两个pH单位。 洗脱时，应将环境pH调至低于该化合物pKa至少两个pH单位，此时该化合物99%呈中性状态。 以弱酸性化合物HA为例 固相萃取柱的分类 阳离子交换柱 如SCX、PRS、PCX等 目标化合物：阳离子（碱性）化合物 样品溶液：样品溶液pH要小于其pKa两个单位 洗脱液：洗脱溶液pH要大于其pKa两个单位 固相萃取柱的分类 阴离子交换柱 如SAX、PAX等 目标化合物：阴离子（酸性）化合物 样品溶液：样品溶液pH要大于其pKa两个单位 洗脱液：洗脱液pH要小于其pKa两个单位 固相萃取柱的分类 离子交换柱通用操作流程 活化/平衡：样品溶液为非极性溶剂时，用样品溶剂来活 化平衡；样品溶剂为极性溶剂时，先用水溶 性有机溶剂活化，再用样品溶剂平衡 上样：样品溶液 淋洗：依次用水和有机溶剂淋洗 阳离子交换柱：常用氨水溶液和氨水甲醇溶液 洗脱： 阴离子交换柱：常用甲酸水溶液和甲酸甲醇溶液 固相