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青海师范大学 生地学院 孙玉侠、余 涛 何为分子标记？ 分子标记的概念有广义和狭义之分。 广义的分子标记是指可遗传的并可检测的DNA序列或蛋白质。 狭义分子标记是指能反映生物个体或种群间基因组中某种差异的特异性DNA片段。而这个界定现在被广泛采纳。 分子标记技术可用于： 分子标记技术 第1代分子标记 RFLP标记技术：限制性片段长度多态性 (Restriction fragment length polymorphisms，RFLP) RAPD标记技术：随机扩增多态DNA技术 (Random Amplified Polymorphism DNA，RAPD) AFLP标记技术：限制片段选择扩增技术 （Selective restriction fragment amplification，SR） RFLP标记技术（限制性片段长度多态性 ） AFLP标记技术（限制片段选择扩增技术） 它的原理是基因组DNA双酶切，经PCR扩增后的限制性片段进行选择。 其基本步骤为：先用两种限制性内切酶(一种为6碱基内切酶，如EcoRI，Pst工等，另一种为4碱基内切酶，如Msel)对DNA进行酶切，然后在酶切片段上连上一个接头(adapter)，根据接头的核苷酸序列和酶切位点设计引物，进行特异PCR扩增，扩增产物通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离检测。 第2代分子标记  ISSR标记技术 （ 内部简单重复序列） 第三代分子标记 SNP标记技术（单核苷酸多态性） EST标记技术 是指在来源于不同组织的eDNA文库中随机挑选克隆、 测序，得到部分cDNA序列，一个EST对应于某一种mRNA 的cDNA克隆的一段序列，长度一般为150——500 bp，只 含有基因编码区域。 可代表生物体某种组织某一时间的一个表达基因， 所以被称之为“表达序列标鉴”； 而FBT的数目则显示出其代表的基因表达的拷贝数， 一个基因的表达次数越多，其相应的cDNA克隆越多， 所以通过对cDNA克隆的测序分析可以了解基因的表 达丰度。 分子标记技术的发展 分子标记作为一种高通量、能自动检测基因组中 核苷酸序列变化的标记方法，已经被广泛应用于动 植物的遗传研究中，主要集中在基因定位 、辅助育 种选择 、功能基因鉴定 、遗传多样性分析 、疾病 诊断与治疗 等方面。 另外，由于氨基酸密码子的兼并性，这种差异可以导致沉默突变而不影响氨基酸的翻译，在表型上没有变化。 因此，分子标记用在辅助育种进行选择及作为疾病 诊断的特异标记时，必须把基因型与表现型结合起来。 随着功能基因组时代的到来，开发并应用与功能基 因紧密连锁的分子标记，特别是利用基因本身序列 开发的功能分子标记，已成为鉴定和选择目的基因 的有效途径。 各类分子标记的开发都是基于基因组核苷酸序列 的差异，这种差异可能是内切酶识别序列的差异、 编码区的差异、非编码区的差异、启动子的差异、 调控序列的差异等。这些差异可以是错义突变、移 码突变，导致氨基酸变化引起表型变异，也可能是 产生无义突变而导致多肽链的翻译提前终止，从而 产生无功能的蛋白质。 * （Molecular Markers） 遗传标记的类型及发展 ?遗传标记(genetic markers)是研究生物遗传变异规律及其物质基础的重要手段。遗传标记主要有4种类型: ? 形态标记（morphological markers） ? 细胞学标记（cytological markers） ? 生化标记（biochemical markers） ? 分子标记（molecular markers） 性别鉴定与控制 DNA分子标记 辅助选种 亲缘关系的分析