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（二）单克隆抗体技术 抗体是怎样产生的？ 问题4 每一个B淋巴细胞只合成和分泌一种特异性抗体。 传统制备抗体的方法是向动物体内反复注射某种抗原，使其产生抗体，然后从动物血清中分离所需抗体。这种方法有什么缺陷？ 问题5 产量低、纯度低、抗体特异性差。 怎样才能获得大量的特定抗体？ 问题6 单个B淋巴细胞进行无性繁殖，即通过克隆形成细胞群。 1、单克隆抗体的概念 由单个B淋巴细胞克隆形成的细胞群产生的化学性质单一、特异性强的抗体就是单克隆抗体。 B淋巴细胞：能产生抗体，体外培养不能无限增值。 骨髓瘤细胞：体外培养可无限传代，不能产生抗体。 2、单克隆抗体的制备 1975 英国 米尔斯坦和柯勒 杂交瘤技术 2、单克隆抗体的制备 骨髓瘤细胞 抗原 小鼠 B淋巴细胞 体外培养 体内培养 单克隆抗体 杂交瘤细胞 融合 筛选 产生特定抗体的杂交瘤细胞 培养 筛选 3、单克隆抗体的应用 特异性强、灵敏度高、可大量制备。 作为诊断试剂 治疗疾病和运载药物 人类在预防与诊疗传染性疾病过程中，经常使用疫苗和抗体。已知某传染性疾病的病原体为RNA病毒，该病毒表面的A蛋白为主要抗原，其疫苗生产和抗体制备的流程之一如图： 请回答： (1)过程①代表的是________。 (2)过程②构建A基因表达载体时，必须使用________和________两种工具酶。 人类在预防与诊疗传染性疾病过程中，经常使用疫苗和抗体。已知某传染性疾病的病原体为RNA病毒，该病毒表面的A蛋白为主要抗原，其疫苗生产和抗体制备的流程之一如图： (3)过程③采用的实验技术是________，获得的X是________。 (4)对健康人进行该传染病免疫预防时，可选用图中基因工程生产的________所制备的疫苗。对该传染病疑似患者确诊时，可从疑似患者体内分离病毒，与已知病毒进行________比较；或用图中的________进行特异性结合检测。 第二节 动物细胞工程 动物细胞培养 动物细胞融合 单克隆抗体制备 体细胞克隆 细胞核移植 动物细胞工程技术 一、动物细胞培养 （一）概念 从动物机体中取出相关组织，将它分散成单个细胞，放在适当的培养基中，使之生长和增殖的技术。 动物 组织块 剪碎 胰蛋白酶 单个 细胞 加培养液 制成 细胞 悬浮液 10—50 代细胞 （二）过程 贴壁细胞 原代培养 脱离、分瓶 传代培养 少部分细胞突破细胞寿限，获得不死性 细胞群 问题1 动物细胞培养时用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是什么成分？用胃蛋白酶行吗？ 用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是蛋白质。胃蛋白酶作用的适宜pH约为2，当pH大于6时，胃蛋白酶就会失去活性。胰蛋白酶作用的适宜环境pH为7.2～8.4。多数动物细胞培养的适宜pH为7.2～7.4，胃蛋白酶在此环境中没有活性，而胰蛋白酶在此环境中活性较高，因此胰蛋白酶适宜用于细胞培养时的细胞分散过程。 问题2 胰蛋白酶会把细胞分解掉吗？为什么？ 胰蛋白酶除了可以分解细胞间的蛋白外，长时间的作用也会分解细胞膜蛋白，对细胞有损伤作用，因此必须控制好胰蛋白酶的作用时间。 问题3 体外培养细胞时需要提供哪些物质？ 问题4 体外培养的细胞需要什么样的环境条件？ （三）动物细胞培养的条件 1. 无菌、无毒的环境 添加一定量的抗生素，定期更换培养液。 2. 营养物质 糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素以及动物或人血清等。 合成培养基：将细胞所需的各种营养物质按其种类和所需数量严格配制而成的培养基。 问题5 为什么对动物细胞进行培养时要添加血清？ 血清中含有蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素等，其中蛋白质主要为白蛋白和球蛋白。有些氨基酸是必需氨基酸，必须由培养液提供。血清激素有胰岛素、生长激素等及多种生长因子；血清还含有多种未知的促细胞生长因子及其他活性物质，能促进细胞的生长、增殖和贴附。因此，细胞培养时，要保证细胞能够顺利生长和增殖，一般需添加10%～20%的血清。 3. 温度和pH 温度 pH 4. 气体环境 与体内相近 36.5±0.5℃ 7.2~7.4 O2 CO2 细胞代谢所必需 维持pH CO2培养箱（95% 空气＋5% CO2 ） 大规模培养生产蛋白质生物制品（病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体） 获得大量自体的皮肤细胞，解决烧伤病人的植皮问题 检测有毒物质，判断某种物质的细胞毒性 筛选抗癌药物，为治疗和预防癌症及其他疾病提供理论依据 （四）动物细胞培养技术的应用 二、动物细胞核移植技术和克隆动物 问题1 我们能否利用类似植物组织培养获得完整植物体的方法培养动物细胞，使其发育成一个完整的个体？ 不能，高度分化的植物细胞仍保持着全能性，而动物细胞的全