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第二章 DNA的复制 第一节 DNA的半保留复制 第二节 复制的起点、方向和速度 第三节 复制的几种主要方式 DNA复制的半不连续性 第四节 DNA复制的酶学 第五节 DNA复制的起始，延伸和终止 第六节 真核生物的DNA复制 第一节 DNA的半保留复制 DNA的复制机制: 1954年，Watson和Crick最早提出DNA的半保留复制, 即在复制过程中双链DNA氢键断裂，双螺旋解旋并被分开，每一条链分别为模板合成其互补链, 产生双链。由于新生的互补链与母链构成子代DNA分子，所以称为DNA的半保留复制 (semi-conservative replication）。 3、DNA半保留复制的生物学意义： DNA的半保留复制表明DNA在代谢上的稳定性，保证亲代的遗传信息稳定地传递给后代。 第二节 复制的起点、方向和速度 一、 复制子和复制起点 2. 复制起始点 复制时，DNA要解开双链分别进行，打开双螺旋的位置就是一段特定的DNA序列，叫做复制起始点，常用ori或O表示。 复制起始点（ori）有特定的结构特点，便于特定的酶来识别，起始 DNA的复制。 一个复制子只含有一个复制起点，但可以以双向或单向进行复制。 特点： 所有基因组DNA的复制原点都处于双螺旋结构内部，就是线状DNA复制原点也不在末端 。 原核生物的复制起始点的结构、特点 p44 Eg. 大肠杆菌的复制起始点（oriC）的结构特征 ① (A+T)含量占56%； ②在oriC中,除了碱基序列高度保守之外,而在某些部分虽然碱基种类不十分保守,但碱基数目却是保守的； ③在oriC中,有9个~14个GATe位点(大肠杆菌有11个),其中有8个GATe位点在6种oriC中的位置完全保守； ④有四个高度保守的DnaA识别位点R1, R2, R3, R4。 大肠杆菌复制起点的核苷酸序列特征 二、复制方向和复制叉 复制起点的性质所决定DNA复制从特定位置开始,大多数双向进行,也有一些单向的,或以不对称的双向方式进行的。 三、复制速度 速度：原核生物复制 速度快，平均约800bp/s,单复制子，约20min一代，40min复制一次； 真核生物复制速度慢，复制速度50bp/s，多复制子，约6-8h完成一次复制。 DNA复制主要是向两个方向等速进行。 复制眼：DNA正在复制的部分在电镜下观察起来象一只眼睛，称为复制眼(replication eye)。 θ型结构（θ structure ）指正在复制的环形DNA由于复制眼的存在而呈θ型，称为θ型结构。例如：大肠杆菌DNA。 结果 释放出的新合成的单链； 先复制成双链DNA，被酶切割成单位长度后，再形成环状双链DNA分子； 释放出的新合成的单链DNA，先被酶切割成单位长度形成单链环状DNA分子后再复制成双链环状DNA分子。 滚环复制适用于双链环状分子复制单链环状分子：噬菌体ф×174DNA（双链环状）就是利用这种方式产生其后代的。 滚环复制用于基因扩增：丝心蛋白 第四节 原核生物和真核生物DNA复制的特点 DNA聚合酶和聚合反应 p47 三种DNA聚合酶的结构和功能 DNA连接酶 与DNA几何学性质相关的酶 p 44 一、 DNA的聚合酶 1 DNA聚合酶的发现与种类: DNA聚合酶是DNA合成中起主要作用的酶， 1957年, Arthur kornberg首次发现DNA聚合酶I ,后来又相继发现了DNA聚合酶Ⅱ 、Ⅲ，最近又发现了IV和V（功能尚不详） 。 前三种 DNA聚合酶都具有催化DNA合成的共同特点,同时具有其他酶活性。 酶活性简介： （1）5’－3’ DNA聚合酶活性： （2）3‘→5’外切核酸酶活性　 （3）5‘→3’外切核酸酶活性 （4）核酸内切酶活性 : DNA聚合酶I (DNA Polymerase I，Pol I) ： DNAPolⅠ在空间结构上近似球体。在酶的纵轴上有一个约20A的深沟(cleft)，带有正电荷，这是该酶的活性中心位置，在此位置上至少有6个结合位点: [1]模板DNA结合位点; [2]DNA生长链或引物结合位点; [3]引物末端结合位点，用于结合专一引物或DNA生长链的 3′-OH; [4]脱氧核苷三磷酸结合位点; [5]5′→3′外切酶活性位点，用以结合生长链前方的5 ′ -端脱氧核苷酸并切除之; [6]3′ →5′外切酶活性位点，用以结合和切除生长链上未配对的3-端核苷酸。 2. 切口平移(Nick Translation)： 应用：同位素标记 四、 DNA连接酶(DNA Ligase) DNA连接酶可以使切刻接合，即催化单链