DNA甲基化酶白在人胃癌组织中的表达及其临床意义.pdfVIP

上海交通大学医学院八年制博士论文 DNA 甲基化酶蛋白在人胃癌组织中 的表达及其临床意义 摘 要 目的 消化道肿瘤发病率高, 危害性大。大量研究业已证明包括胃癌 在内的恶性消化道肿瘤，其发生发展是多因素、多步骤的过程，其中DNA 甲基化在基因表达调控中具有重要的作用。DNA甲基化是一个可逆性过 程：一方面DNA甲基化酶(DNA methyltranferase,Dnmt)催化甲基基团转 移至胞嘧啶参与甲基化的形成(主要是Dnmt3a和Dnmt3b)和维持（主要是 Dnmt1）；另一方面去甲基化酶又起着与Dnmt相反的作用。我们拟使用免 疫组化方法分析胃癌组织标本中Dnmts的表达情况，并探讨其与患者临床 情况的关系。明确1）胃癌、癌旁及其正常组织中的DNA甲基化酶（Dnmt1、 Dnmt3a 和Dnmt3b）表达有何差异。2)胃癌组织中Dnmt蛋白表达差异是否 与其生物学行为有关及其临床意义。 方法 收集我院外科手术并经病理证实为胃癌的患者38 例，每例标 本分别取癌、癌旁和外周正常黏膜组织。所有标本经福尔马林固定，石 蜡包埋，连续切片4 张。其中1 张切片用于HE 染色，由病理医师进行 I 上海交通大学医学院八年制博士论文 胃癌组织学分类。其余3 张通过链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶试剂盒 (SP法)检测组织中Dnmt1，Dnmt3a 和Dnmt3b 蛋白表达。观察该三种抗 体在胃黏膜组织中的表达情况，及不同类型的胃癌组织中表达量的差 异。最后通过SPSS 分析软件进行统计处理，并分析以上免疫组化结果 与胃癌患者一般资料、淋巴结转移的关系。该课题的设计和实施得到了 上海交通大学医学院附属仁济医院医学伦理委员会的批准。 结果 我们的研究表明：1）胃癌组织中 Dnmt1 、Dnmt3a 、Dnmt3b 蛋白表达的阳性率分别为81.6%、81.6%和68.4%，显著高于相应的癌旁 组织（39.5%、50 ％和44.7% ）与正常组织（10.5%、10.5%和 7.9% ）， P0.05 。2 ）阳性切片可见Dnmt1 弥散分布于肿瘤或腺体细胞浆与胞核， 染色较均匀。而Dnmt3a 、Dnmt3b 主要分布于肿瘤或腺体细胞浆，色棕 黄，染色均匀。3 ）Dnmt1 与Dnmt3a 蛋白表达显著相关(P0.01) ；未发 现Dnmt1 与Dnmt3b 之间存在相关性(P0.05) ；Dnmt3a 与Dnmt3b 间有 一定相关性呈低度相关(P0.05) 。4 ）Dnmt1 蛋白阳性程度与年龄、淋巴 结转移不相关，Dnmt3 家族与患者年龄、性别、肿瘤分化程度和淋巴结 转移均无明显相关。Dnmt1 与性别、组织生物学行为可能存在关联。 结论 我们的研究结果表明：1）胃癌存在Dnmts 过表达，提示其在 胃癌的发生和发展中起有重要作用。Dnmt1 蛋白主要存在于胞浆和胞 核，Dnmt3 家族存在于胞浆。Dnmt1 、3a 蛋白表达量高于Dnmt3b ，提 示在胃肿瘤发生过程中，前两者可能作用更甚。与Dnmt3b 相比，Dnmt3a II 上海交通大学医学院八年制博士论文 在从头甲基化中可能起着更重要作用。2 ）Dnmt3 家族与患者年龄、性 别、肿瘤分化程度和淋巴结转移均无明显相关。Dnmt1 与性别、组织生 物学行为可能存在关联，提示检测其表达量可能对判断患者预后具有一 定意义。 关键词 胃癌，DNA 甲基化酶，免疫组化，组织生物学行为 III 上海交通大学医学院八年制博士论文 THE EXPRESSION AND CLINICAL SIGNIFICANCE OF DNA METHYLTRASFERASES PROTEIN IN HUMAN GASTRIC CANCER ABSTRACT Objective Gastrointestinal (GI)