丹参酮ⅡA对人鳞状细胞癌TCA-83细胞抑制增殖及诱导凋亡的实验研究.pdfVIP

中文摘要 丹参酮IIA对人舌鳞状细胞癌TCA一83细胞 抑制增殖及诱导凋亡的实验研究 摘 要 ceIIcarcinomaofthe 目的：舌鳞状细胞癌(squamous ton鼬e，简称舌癌)是最常见的口腔粘膜恶性肿瘤，恶性程 度高，侵袭性强，易早期转移。目前它的治疗方法仍然是以 手术、化疗、放疗为主的综合治疗，由丁手术创伤大，放、 化疗的毒副作用较强，有必要开发毒性小、治疗效果好的新 型抗肿瘤药物，以降低肿瘤患者死亡率，并提高其生存质量。 以通过对肿瘤细胞的杀伤，抑制肿瘤细胞的生长并能诱导分 化和凋亡，抑制侵袭和转移等机制，发挥其对多种肿瘤细胞 的抗肿瘤活性。但丹参酮IIA对舌癌的影响尚未见报道。本 文旨在通过观察丹参酮IIA对人舌癌细胞Tca一83的体外增 殖、细胞凋亡情况的影响，探讨其抑癌机制，为其临床应用 提供理论依据。 材料与方法：1材料：(1)细胞系：舌癌细胞系为Tca．83， 购自北京大学口腔颌而外科实验室。(2)药品：丹参酮IIA， 中国药品生物制品检定所的对照品。2方法：f1)药液配制： 丹参酮IIA用无水乙醇溶解配制成20m譬／mL储存液，使用前 用培养液稀释。(2)细胞培养：体外培养Tca一83传代细胞株， 箱内饱和湿度培养，48～72h传一代，以0．04％二乙胺四乙 中文摘要 比色实验：取对数生长期细胞制成2×107／L细胞悬液，接种 空白对照组和调零孔，每组6个复孔，继续培养24、48、72、 吸去全部上清液，然后每孔加入200旺的二甲基亚砜，振荡 10min使结晶充分溶解，置酶联免疫检测仪测定各孔在 492nm处的光吸收值(A)，并计算生长抑制率，抑制率=(1． 用药组平均A值／对照组平均A值)x100％，单因素方差分析 各孔吸光度值及生长抑制率，生长抑制率与药物作用浓度及 作用时间关系进行相关分析，Probit回归模型求半数抑制浓 细胞培养液制成2×lO’／mL单细胞：悬液并加入六孔板内的盖 玻片上，用药组细胞在接种24h后加药，使丹参酮IIA终浓 度为10“∥InL，对照组只加培养液，72h后甲醇固定lOmin， Giemsa染色液染15min，自来水冲去多余的染料，空气干燥， 二甲苯透明，树脂封固，于油镜下观察。(5)透射电镜观察： 对照组取正常培养72h的细胞，用药组取loLLg／mL丹参酮IIA 处理72h的细胞，4℃离心收集5×100～】×107个细胞，PBS 液洗2次，用4％戊二醛固定，继续用l％四氧化锇后固定， 脱水、包埋、切片和染色均按常规处理，透射电镜观察。(6) 倒置显微镜观察：随着细胞的生长与繁殖，及时观察用药组 及对照组细胞的生长状况。(7)流式细胞术检测：应用 72h，96h的细胞，用药组收集丹参酮IIA 2．5，5，lO¨g／mL 中文摘要 处理48h的细胞，及经丹参酮IIA5}Lg／mL处理24h，48h， 72h，96h的细胞，将细胞消化成单细胞悬液，预冷PBS洗2 液上机检测，凋亡率分析采用f检验，凋亡率与时问和浓度 关系进行相关分析。 结果：1 的卅参酮IIA作用于细胞24—96h，细胞生长受到抑制，最高 抑制率达70．35％；经方差分析同一时间各组吸光度值与对照 组相比差异均有统计学意义，两两比较除个别组外，多数同 一时问不同浓度吸光度值相比差异有统计学意义，多数相同 浓度不同时间抑制率之间差异有统计学意义；相关分析抑制 率与浓度正相关，随浓度增高抑制率增大，当浓度大于 2．5倒mL时，抑制率与时间正相关，随时间延长抑制率增大； 根据Probit回归模型分析，求得72h IC50值为9．1岖／mL，96h 发现对照组细胞体积大，核大而圆；用药组细胞部分呈现胞 体缩小，核仁减少或消失，胞浆浓缩，核浆比例降低，染色 质浓缩聚集于核膜下，可见核碎裂现象，呈现细胞凋亡的特 征性改变。3透射电镜观察：对照组细胞大而圆，细胞器正 常，染色质均匀分散，密度一致，核膜完整；而用药组细胞 发生皱缩，