人牙龈上皮细胞清液对牙髓细胞增殖及分化影响的研究.pdfVIP

人牙龈上皮细胞上清液对牙髓细胞增殖及分化影响的研究 人牙龈上皮细胞上清液对牙髓细胞 增殖及分化影响的研究 学科专业： 口腔医学 研究生：李晓娜 导 师：凌均柴教授 摘要 dental 目的：本研究拟在体外分别培养人牙髓细胞(humanpulp 人牙龈上皮细胞(human gingivalepithelium _u丁行性，为组织工程再生牙的研究提供实验基础。 材料和方法：①用组织块法进行HDPCs的原代培养，细胞铺满瓶底80％时传 代。倒置显微镜下进行形态学观察，取第4代HDPCs细胞直接计数法测定 CK)的免疫组化染色，进行细胞来源鉴定。②用改良组织块法和酶消化法进行 HGECs的原代培养，待细胞铺满瓶底80％时，进行细胞传代，倒置显微镜下进 u 密度接种于96iL板中，每孔100l，培养24h后，吸去原培养基。实验组为将 l、100u 20ul、60p 人才龈上皮细胞上清液对牙髓细胞增殖及分化影响的研究 比例(即20ul、60 u 至每孔200ta1；空白对照组为每孔加入200 iL板通过对培养后HDPCs MTT法研究对HDPCs增殖的影响；第7d取1块96 细胞裂解液中ALP测定，研究对HDPCs分化的影响。 7d进入生长饱和期后细胞的数量也有所下降；HDPCs免疫组化染色显示波形丝 蛋白为阳性，CK染色阴性，证实为成纤维细胞；HDPCs增殖能力较好，并可见 钙化结节形成。②HGECs在倒置显微镜下呈多角形，核大，长满后呈铺路石样； 细胞生长曲线呈“滞缓一对数生长．平台”的“S”形模式；CK免疫组化染色为阳 性，牙髓成纤维细胞对照为阴性，证实为上皮细胞。③相对于空白对照组(即 殖和分化均有促进作用，并呈时间一剂量依赖关系：相对阴性对照组(即K—SFM 上升。 结论：①采用组织块法成功建立了HDPCs的体外培养模型；②体外培养出的 HDPCs具有较强的向成牙本质细胞分化的能力，能分泌形成类牙本质样的钙化结 节，证实牙髓组织中存在有分化潜能的牙髓干细胞(DPSCs)；⑧采用改良组织 II冷消化法结合无血 块法和酶消化法均可成功培养出HGECs；④采用Dispase 清培养基培养，可有效抑带I]HGECs体外培养过程中成纤维细胞的污染，获得纯 化的HGECs，培养出的细胞在形态学和免疫学方面均符合上皮细胞的特征，能 增殖和分化均有促进作用，并呈时间一剂量依赖关系，证实HGECs分泌的町溶 型是可行的。 关键词：牙髓细胞 牙髓干细胞 牙龈上皮细胞 上清液 增殖 分化 共培养 人牙龈上皮细胞上清液对牙髓细胞增殖及分化影响的研究 of fromhuman The oneffects study supernatants gingival onthe and cellsculturesproliferation epithefial differentiationofhumandentalcells pulp