微生物快速检测技术要点.ppt

8、微生物的快速检测 常见微生物检测项目 常规微生物项目：细菌总数、大肠菌群、大肠杆菌、酵母总数、霉菌总数。 致病微生物项目：沙门氏菌、李斯特菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌O157：H7、弯曲杆菌、致病弧菌、副溶血弧菌、志贺氏菌、假单胞菌等。 国家标准GB/T 4789 1-40：食品卫生微生物学检验：菌落总数测定、大肠菌群计数、沙门氏菌检验、志贺氏菌检验、致泄大肠埃希氏菌检验、副溶血性弧菌检验、小肠结肠炎耶尔森氏菌检验、空肠弯曲菌检验、金黄色葡萄球菌检验、溶血性链球菌检验、肉毒梭菌及肉毒毒素检验、产气荚膜梭菌检验、蜡样芽孢杆菌检验、霉菌和酵母菌计数、常见产毒霉菌的鉴定、椰毒假单胞菌酵米面亚种检验、单核细胞增生李斯特氏菌检验、肠杆菌科噬菌体检验、大肠菌群快速测定、双歧杆菌检验、乳酸菌检验、大肠埃希氏菌O157：H7/NM检验、阪崎肠杆菌检验等。 政府检测机构为什么需要微生物快速检测？ 提高检测效率 节约人力资源成本 与国际接轨 企业为什么需要微生物快速检测？ 市场销售环节要求快速出货。尤其是一些保质期较短的产品。 减少物流的压力，尽可能减少仓存，加快资金周转。 节约人力资源成本（外资企业尤其突出） 对于运行HACCP质量保证体系的企业来说，快速检测方法尤其重要。可以快速检测原料及半成品的污染情况，以采取相应的措施控制最终产品的微生物超标情况。 快速检测方法势在必行！！ 国外许多政府检测机构都在大量使用快速检测方法，尤其是ATP法、免疫法、阻抗法和显色培养基法在国外应用相当成功。 国内的许多政府检测机构也都已经在使用或正在考虑使用国外先进的快速检测技术。 从长远发展趋势来说，快速方法是微生物检测的一大方向。 一、常规微生物快速检测技术现状 传统计数改良法： 1、螺旋平板计数法：螺旋接种仪＋菌落计数 2、滤膜法：常用于一些可过滤样品的检测。 3、纸片法：培养基固定在载体上。省去制做培养基的时间。主要用于细菌总数检测。 4、其它：如Simplate即用胶,改良MPN产品。 螺旋平板法 螺旋平板原理 螺旋平板法的优缺点 优点： 与传统方法相比，无需稀释3个梯度，每个梯度倒2个平板，节省了大量人力物力。 缺点： 检测时间并没有缩短，菌落总数仍需要培养48小时。 需要配合自动菌落计数仪，否则人工计数更麻烦。 滤 膜 法 滤膜法常用于可过滤样品的微生物检测。 优点：灵敏度增大，菌落无扩散情况，便于计数。 缺点：需要额外的支出购买真空泵，多联支架及一次性滤膜；如果抽滤过程空气洁净度不够，有可能造成二次污染，尤其是对菌数要求特别严格的产品，如啤酒，澄清果汁，桶装饮用水等。 皿膜法—以纸片法为代表 优点：无需制备培养基，携带方便，非漫延菌落计数较方便。 缺点：不能节省检测时间。检测成本相对偏高。大肠菌群纸片存在与MPN法无法对应的问题，金黄色葡萄球菌纸片存在取样量太低的问题。目前仅细菌总数纸片有一些用户。 其它即用胶，MPN改良法 SimPlateTMTPC 法：基于食源性细菌的蛋白质有特异性酶类，TPC培养基内含有多种细菌酶类所对应的底物。检样被细菌污染时，只要具有一种酶的活性即能与底物作用生成4-甲基伞形酮，培养24h后，在紫外线照射下，发出蓝色荧光。 食源性细菌悬浮于TPC培养基表面，在分隔的小池内能迅速进行生化反应，若有检样颗粒亦无干扰；它不是由48h形成的菌落来计数，而是24h后在紫外灯照射下记录培养皿内能发出蓝色荧光的阳性池数，进而由最大近似值(MPN) 表查出细菌的MPN。阳性池数与MPN 呈松泊分布。 固定底物技术酶底物法，需要coliert试剂 采用大肠菌群细菌能产生D-半乳糖苷酶分解ONPG（邻硝基苯β-D-半乳吡喃糖苷）使培养液呈黄色，以及大肠埃希氏菌产生D-葡萄糖醛酸酶分解MUG（4-甲基伞形酮-D-葡萄糖醛酸苷 ）使培养液在波长366nm紫外光下产生荧光的原理，来判断水样中是否含有大肠菌群及大肠埃希氏菌。只需24小时即可同时定量出水样中大肠菌群和大肠埃希氏菌的MPN值。 二、常规微生物快速检测技术现状 快速检测微生物数量的新方法： 1、ATP法：目前产品较多，如CHARM，Biotrace, …..等。 2、电化学法：Sy-Lab公司Bactrac 4300，Tempo,… 3、颜色变化：如梅里埃的Bact/Alert和Foss的MicroFoss。 4、流式细胞技术及激光扫描技术 5、其它：热量法，放射测量法 表面洁净的检测方法 微生物学法：纸片、琼脂板、棉签拭子、海绵拭子 非微生物学法（快速法）：ATP(三磷酸腺苷，蛋白质, 降解糖、NADP(辅酶II)，其它。 ATP法两大用途 LUM-T的独特优势 CHEF 熟肉制品成熟度检验 MicroQ 水中微生物污染程度检测 Cidelite