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中山大学硕士论文 膜I型基质金属蛋白酶在人乳牙破牙细胞中的表达 中文摘要 膜I型基质金属蛋白酶 在人乳牙破牙细胞中的表达 专 业：口腔临床医学 硕士研究生：王娇翠 导 师：赵玮副主任医师 中文摘要 乳牙根吸收是一种区别于恒牙的重要生理现象，最终导致乳牙的脱落，多核 破牙细胞(odontoclast)是引起牙体硬组织吸收的主要功能细胞。破牙细胞与引 起骨吸收的破骨细胞(oaeoclast)在组织学形态和超微结构等方面具有相似性， 如胞体大，细胞器丰富，突触多，TRAP染色阳性等，并具有硬组织吸收功能， 但二者在形态和功能等方面亦存在差异。 牙齿与骨组织具有相似的物理化学特点，吸收过程相似，均包括羟基磷灰石 脱矿和有机物降解。研究表明，破骨细胞或破牙细胞分泌多种蛋白水解酶，参与 调节硬组织的吸收。基质金属蛋白酶(matrix 重要的细胞外基质蛋白酶，以酶原形式分泌到细胞外，活化后降解有机基质。目 MMPs)和膜型MMPs 前共发现20余种MMPs，分为可溶性MMPs(soluble (membrane-type 蛋白酶，共有6种。 膜I型基质金属蛋白酶(membrane-typel MTI．MMPs中分布最为广泛的成员，能够直接降解多种细胞外基质大分子，并 参与激活其他蛋白酶原，引起水解的级联效应，由于其具有广泛的功能得到了学 中山大学硕士论文 膜I型基质金属蛋白酶在人乳牙破牙细胞中的表达 中文摘要 者的关注。近年研究发现，MTl．MMP作为重要的蛋白水解酶，在多部位肿瘤、 炎症、创伤愈合、血管形成、卵巢发育等多种病理和生理组织中高表达并发挥功 能。在破骨细胞中，MTl．MMP阳性表达于细胞前沿即胞膜突触处，推测 MTl．MMP可能对破骨细胞向骨吸收表面的迁移、黏附起到重要的作用。由于破 牙细胞与破骨细胞具有相似的酶化学特点，推测MTI．MMP可能在体外分离的 破牙细胞中有表达。本实验拟采用酶消化法，分离培养、鉴定成熟的破牙细胞， 进行细胞形态学观察和吸收功能的检测，为牙根吸收机制的研究提供细胞模型； 采用免疫细胞化学方法检测体外培养人乳牙破牙细胞中MTl．MMP蛋白的表达， 分析MTl．MMP在牙根吸收过程中的作用，为探讨牙根吸收的机制提供根据。 目的 体外分离、培养成熟的破牙细胞，并从形态和功能等方面进行细胞鉴定，建 立破牙细胞体外分离方法，为牙根吸收机制的研究建立细胞模型；检测 MTl．MMP在体外分离培养破牙细胞中的表达，探讨MTI．MMP在乳牙根吸收过 程中的作用。 材料和方法 1．收集中山大学附属口腔医院儿童口腔科5～7岁因滞留或咬合诱导而需要 拔除的无龋及未经治疗的乳前牙，采用I型胶原酶和分散酶联合消化的方法分离 破牙细胞，观察细胞形态并进行细胞鉴定。 2．应用免疫细胞化学方法检测体外培养的破牙细胞中MTl．MMP蛋白的表 达。 结果 体外分离得到的细胞具有典型的多核巨细胞特点，细胞大小不一，形态不规 则，呈油煎蛋形、梭形、扇形、圆形等，细胞多突触，胞核数目不等(几个到十几 个)，细胞TRAP染色阳性。细胞与骨磨片共培养3天后，在倒置显微镜下观察可 见吸收陷窝的形成，证实分离培养的细胞具有硬组织吸收功能。免疫组织化学显示， 中山大学硕士论文 膜I型基质金属蛋白酶在人乳牙破牙细胞中的表达 中文摘要 体外分离的破牙细胞MTl．MMP表达阳性，分布于破牙细胞胞膜～侧，或呈不 连续环状位于胞膜表面。 结论 1．应用酶消化法可以从新鲜离体吸收乳牙根表面分离得到成熟的破牙细 胞，与破骨细胞具有相似的组织形态学特征，且具有硬组织吸收功能。 2．本实验体外分离培养的人乳牙破牙细胞表达MTl．MMP，提示MTI—MMP 可能参与乳牙根吸收过程，对破牙细胞向吸收根表面移动和黏附起到重要作用。 关键词破牙细胞，乳牙，牙根吸收，膜I型基质金属蛋白酶 中山大学硕士论文 膜I型基质金属蛋白酶在人乳牙破牙细胞中的表达