荧光定量PCR的原理与应用要点.pptVIP

荧光定量PCR的原理与应用 实时荧光定量PCR 定义： 在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法 三个重要概念 扩增曲线 荧光阈值 Ct值 实时荧光定量PCR 原理 － 扩增曲线 实时荧光定量PCR 原理－荧光域值 实时荧光定量PCR 原理－Ct值 Ct值的重现性 荧光定量PCR的定量原理 理想的PCR反应： X=X0·2n 非理想的PCR反应： X=X0 ·(1+Ex)n n：扩增反应的循环次数 X：第n次循环后的产物量 X0：初始模板量 Ex：扩增效率 荧光定量PCR的定量原理 在扩增产物达到域值线时: XCt=X0 (1+Ex)Ct =M (1) XCt:荧光扩增信号达到域值强度时扩增产物的量. 在域值线设定以后,它是一个常数,我们设为M 方程式(1)两边同时取对数得: log M=log X0 (1+Ex)Ct (2) 整理方程式(2)得: log X0= - log(1+Ex) ·Ct+ log M (3) Log浓度与循环数呈