牙龈卟啉单胞菌绿脓假单胞菌侵入肺上皮细胞过程中stat3survivin通路的影响.pdfVIP

·中文论著摘要· 牙龈卟啉单胞菌对绿脓假单胞菌侵入肺上皮细胞过 程中Stat3／Survivin通路的影响 目的 牙周病是人类最常见的慢性感染性疾病。近年来，许多国内外的专家研究证 实牙周感染可能是引发全身系统疾病(心血管疾病、糖尿病、呼吸系统疾病、骨 质疏松、低体重早产儿等)的独立或联合危险因素。 近年来，牙周病与呼吸道疾病，尤其是医院内获得性肺炎、慢性阻塞性肺疾 病的关系越来越受到人们的重视。目前普遍认为牙菌斑以一种复杂的生物膜形式 存在，是住院病人感染，尤其是呼吸道感染致病菌的储存库。绿脓假单胞菌 (Pseudomonas 可以通过粘附和侵入宿主上皮细胞，导致呼吸道和其他全身系统的感染。研究发 现口腔细菌，尤其是牙周可疑致病菌，如牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis，P 的释放，调控细胞凋亡，进而引发或加重呼吸道感染。 调控细胞凋亡的信号传导通路复杂多样，早期的研究报道表明只gingivalis 中JAK／Stat3信号传导通路代表的是一条极其快速的从细胞外到细胞核的信号传 导通路。许多细胞因子(如IL．6等)可活化Stat3，通过调节目的基因转录，进 而影响细胞的增殖、凋亡、分化与转化。Survivin作为细胞凋亡抑制蛋白家族 (inhibitor ofapoptosis 重要的靶基因，可通过直接或间接抑制凋亡蛋白酶caspase．3活性而阻断细胞凋 亡。Mao 的表达，抑制牙龈上皮细胞的凋亡。本课题组发现只gingivalis的侵入可以抑制 Paeruginosa诱导的肺上皮细胞的凋亡，但其确切的机制仍然不明确。 本实验拟建如aeruginosa和Pgingivalis单独和共同侵入肺上皮细胞的体外 模型，通过RT-PCR、real．timeRT-PCR和Western 表达，从转录和翻译两个层面探讨只驴谚v口凰是否通过Stat3；／SuⅣi访n细胞内信号 传导途径参与调控只aeruginosa诱导的肺上皮细胞凋亡过程。 方法刀硪 一、研究对象 呼吸道致病菌：绿脓假单胞菌(Pseudomonas BAA-47 PA01模式株) 12腔细菌：牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas 381 模式株) CCL一185) 呼吸道上皮细胞：A549细胞株(人肺腺癌细胞株，ATCC 二、研究方法 I、选择P 381模式株和A549细胞株， aeruginosaPAOI模式株、只gingivalis 8、12小时的体外模型。 2、利用RT-PCR和real-time mRNA 的表达。 3、利用Westernblot方法分别检测P gingivalis单独或共同侵 aeruginosa和Z 入A549细胞2、4、8、12小时后Stat3和Survivin蛋白的表达。 三、统计学处理 计软件进行分析，各组间均数的比较采用方差分析，P0．05为差异有统计学意义。 ■■●●●，11’ 结果 mRNA 表达的影响 P mRNA，其表达量为 aeruginosa单独侵入A549细胞2小时即可诱导stat3 空白对照组的1．2倍，并持续表达至4小时，而后随着细菌侵入时间的延长，其