柚皮苷对体外培人牙髓细胞增殖及分化影响的研究.pdf

目 录 中文摘要……………………………………………………………………．1 英文摘要……………………………………………………………………．4 研究论文柚皮苷对体外培养人牙髓细胞增殖及分化影响的研究 前言……………………………………………………………………．．8／5 日Ⅱ舌……………………………………………………………………” 材料与方法……………………………………………………………．8 结果……………………………………………………………………．13 刍日7K…………………………………………………………。…………1。 附图……………………………………………………………………．16 附表……………………………………………………………………．20 讨论……………………………………………………………………．22 结论…………………………、．．………………………………………．．27 参考文献………………………………………………………………．27 综述与牙髓细胞向成牙本质细胞分化相关标记物的研究进展………．30 致谢…………………………………………………………………………38 个人简历……………………………………………………………………．39 中文摘要 柚皮苷对体外培养人牙髓细胞增殖及 分化影响的研究 摘 要 目的：本实验通过采用人牙髓细胞体外培养的方法，探讨不同浓度柚 皮苷对体外培养人牙髓细胞增殖、分化、矿化、．细胞周期及碱性磷酸酶 (ALP)活性的影响。 方法：选择因正畸或阻生新鲜拔除的健康、完整、无龋、无隐裂的恒 牙或第三磨牙，在无菌的条件下取出牙髓组织，采用组织块酶解法获取人 牙髓细胞并进行原代培养。待细胞长出后在倒置显微镜下观察细胞形态及 生长情况。当细胞生长至铺满孔底80％时进行传代，细胞传代成功后，取 第4代对数生长期人牙髓细胞进行细胞爬片，用SABC法进行波形丝蛋白 和角蛋白免疫组织化学染色鉴定细胞来源。将处于对数生长期的第4代人 分别接种于96孔培养板中，每板余出一列培养孔不加液，其余各孔每孔液 量2001．tl，培养箱中培养。观察细胞贴壁情况良好后弃上清液，PBS缓冲 液清洗3次后吸干。将细胞随机分为5个实验组、1个对照组和1个空白对照 组，每组选5个孔。实验组：在相应的有细胞孔内加入200“l用含15％标准 10母mo儿的柚皮苷。对照组：在相应的有细胞孔内加入20％1含15％标准 胎牛血清的高糖DMEM培养液。空白对照组：在相应的无细胞孔内加入 2001．d含15％标准胎牛血清的高糖DMEM培养液。 MTTH,色法检测柚皮苷对人牙髓细胞增殖能力的影响：分别于培养 下各孔的吸光度值。 CCK．8法检测柚皮苷对人牙髓细胞增殖能力的影响：分别于培养24h、 48h和72h时随机取出一个96孔培养板，弃孔内液体，向所测孔内加入1 10斗l 中文摘要 板在培养箱内孵育2d,时，用酶标仪测定在450nm处的吸光度值。 流式细胞术检测柚皮苷对人牙髓细胞的细胞周期的影响：选用含15％ 作为试验组，与对照组(15％标准胎牛血清的高糖DMEM培养液)进行细 胞周期试验。按照细胞周期试剂盒说明书操作，进行流式细胞仪分析。 检测柚皮苷对人牙髓细胞的碱性磷酸酶活性的影响：分别在药物作用 无完整结构，经震荡后，按碱性磷酸酶试剂盒说明书加入碱性磷酸酶底物， 应，以空白对照孔调零，在酶标仪上测定410nm下各孔的吸光度值。、 茜素红染色法检测柚皮苷对人牙髓细胞矿化结节形成的影响：选用第 分为对照组和10‘7mol／L浓度的柚皮苷处理后的实验组，每组设3个复孔。 分别培养14d、28d后，进行茜素红染色，观察矿化结节的形成。 柚皮苷对人牙髓细胞牙本质涎磷蛋白mRNA表达的影响：选用第4 的柚皮苷作为试验组，以15％标准胎牛血清的高糖DMEM培养液作为对 蛋白基因的表达。． 采用SPSS13