分子生物学实验指导书资料.docVIP

实验指导书 院系： 生态与资源工程系 专业： 生物工程 课程： 分子生物学 编者： 生物工程教研室 目 录 实验一 植物总DNA的提取 3 实验二 DNA琼脂糖凝电泳定量及质量检测 6 实验三 PCR扩增获取目的基因 9 实验四 大肠杆菌感受态细胞的制备与质粒DNA分子转化 10 实验一 植物总DNA的提取 一、实验目的： 通过实验学习和掌握植物总DNA提取和纯化的原理和方法，并为后续的实验准备DNA样品。 二、实验原理与方法： 2.1 DNA提取的原理 植物组织中总DNA的提取首先要破碎细胞。植物细胞具有坚硬的细胞壁，液氮冷冻和研磨是破碎植物细胞壁的有效方法。而细胞膜、核膜等膜体系的破坏则通过加入提取缓冲液中的去污剂的处理来实现。常用的去污剂有SDS(sodium dodecyl sulfate，十二烷基硫酸钠)，CTAB(cetyltrimlthylammonium bromide，十六烷基三乙基溴化铵)等。细胞壁、细胞膜及核膜破坏后，释放出细胞内含物至提取缓冲液，内含物中包括DNA、RNA和蛋白质等。将其他组分除去或降解，然后回收DNA是常采用的一种提取和纯化DNA的技术路线。磨碎的植物组织经提取缓冲液处理后通过离心可沉淀植物组织残渣至试管底部，取上清液、弃残渣，上清中加入苯酚和氯仿（三氯甲烷）处理后经离心蛋白