多重PCR法区分枣园两种菱纹叶蝉及检测其体内枣疯病植原体.pdfVIP

： 昆虫 学 报ＡｃｔａＥｎｔｏｍｏｌｏｇｉｃａＳｉｎｉｃａ，Ｍａｒｃｈ２０１５，５８（３）２６４－２７０ ｄｏｉ：１０１６３８０／ｊｋｃｘｂ２０１５０３００５ 多重ＰＣＲ法区分枣园两种菱纹叶蝉及 检测其体内枣疯病植原体 １，＃ １，＃ １， ２ ２ 郝少东 ，陈昱圻 ，王进忠 ，王　合 ，陶万强 ， １ １ １ 张志勇 ，石小玉 ，周　赛 （１．北京农学院植物科学技术学院，农业应用新技术北京市重点实验室，北京 １０２２０６；２．北京市林业保护站，北京１０００２９） 摘要：【目的】目前发现，北京枣园中的凹缘菱纹叶蝉 Ｈｉｓｈｉｍｏｎｕｓｓｅｌｌａｔｕｓ（Ｕｈｌｅｒ）和片突菱纹叶蝉 Ｈｉｓｈｉｍｏｎｕｓ ｌａｍｅｌｌａｔｕｓＣａｉ混同发生。已知凹缘菱纹叶蝉可以传播枣疯病，而片突菱纹叶蝉是否携带枣疯病植原体尚待证明。 正确鉴别区分枣园中菱纹叶蝉的种类并测定其体内感染枣疯病植原体情况有助于阐明田间枣疯病的流行规律，从 而提出有效的预防枣疯病及其媒介昆虫措施显得十分重要。传统形态学鉴定两种菱纹叶蝉种类的方法局限于雄 性成虫外生殖器，本研究目的在于建立一种快速的分子生物学方法，在区分枣园中两种枣菱纹叶蝉的同时，可检测 虫体内的枣疯病植原体。【方法】以凹缘菱纹叶蝉和片突菱纹叶蝉的ＣＯＩ基因以及枣疯病植原体的１６ＳｒＤＮＡ为扩 增目标，分别设计引物，建立一种包含３对引物的多重ＰＣＲ体系。测试该多重ＰＣＲ体系对叶蝉总ＤＮＡ的灵敏度、 准确性，以及当两种叶蝉ＤＮＡ同时存在时的辨别能力和对枣疯病植原体１６ＳｒＤＮＡ的灵敏度。【结果】该多重ＰＣＲ 可以准确区分凹缘菱纹叶蝉和片突菱纹叶蝉，并对虫体内枣疯病植原体实现检测，其对昆虫总ＤＮＡ的灵敏度达到 ０．０１２ｎｇ，对枣疯病植原体１６ＳｒＤＮＡ模板的灵敏度达到９００拷贝。【结论】该方法极大方便了对枣菱纹叶蝉的田间 种群发生动态及虫体中枣疯病植原体感染的监测。 关键词：凹缘菱纹叶蝉；片突菱纹叶蝉；枣疯病；植原体；多重ＰＣＲ；分子鉴定 中图分类号：Ｑ９６５．８　　文献标识码：Ａ　　文章编号：０４５４６２９６（２０１５）０３０２６４０７ ＭｕｌｔｉｐｌｅｘＰＣＲｆｏｒｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｗｏＨｉｓｈｉｍｏｎｕｓｓｐｅｃｉｅｓ（Ｈｅｍｉｐｔｅｒａ： Ｃｉｃａｄｅｌｌｉｄａｅ）ｉｎｊｕｊｕｂｅｏｒｃｈａｒｄｓａｎｄｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｊｕｊｕｂｅｗｉｔｃｈｅｓ’ｂｒｏｏｍ （ＪＷＢ）ｐｈｙｔｏｐｌａｓｍａｉｎｔｈｅｉｒｂｏｄｉｅｓ １，＃ １，＃ １， ２ ２ ＨＡＯＳｈａｏＤｏｎｇ ，ＣＨＥＮＹｕＱｉ ，ＷＡＮＧＪｉｎＺｈｏｎｇ ，ＷＡＮＧＨｅ，ＴＡＯＷａｎＱｉａｎｇ，ＺＨＡＮＧ １ １ １ ＺｈｉＹｏｎｇ，ＳＨＩＸｉａｏＹｕ，ＺＨＯＵＳａｉ（１．ＢｅｉｊｉｎｇＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＮｅｗＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙｉｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ，ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＰｌａｎｔＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＢｅｉｊｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １０２２０６，Ｃｈｉｎａ；２．ＢｅｉｊｉｎｇＦｏｒｅｓｔＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎＳｔａｔｉｏｎ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００２９，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：【Ａｉｍ】Ｈｉｓｈｉｍｏｎｕｓｓｅｌｌａｔｕｓ（Ｕｈｌｅｒ）ｔｒａｎｓｍｉｔｓｊｕｊｕｂｅｗｉｔｃｈｅｓ’ｂｒｏｏｍ（ＪＷＢ）．Ｃｕｒｒｅｎｔｌｙ，ｔｈｅ ＨｉｓｈｉｍｏｎｕｓｌｅａｆｈｏｐｐｅｒｓｏｃｃｕｒｒｉｎｇｉｎｊｕｊｕｂｅｏｒｃｈａｒｄｓａｒｅａｍｉｘｅｄｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｏｆＨ