梨小食心虫气味结合蛋白GmolOBP3的cDNA克隆、表达谱及结合特性分析.pdfVIP

： 昆虫 学 报ＡｃｔａＥｎｔｏｍｏｌｏｇｉｃａＳｉｎｉｃａ，Ｍａｒｃｈ２０１４，５７（３）２７４－２８５ ＩＳＳＮ０４５４６２９６ 梨小食心虫气味结合蛋白ＧｍｏｌＯＢＰ３的ｃＤＮＡ 克隆、表达谱及结合特性分析 １，２ １ ２ １， 宋月芹 ，解幸承 ，董钧锋 ，仵均祥 （１西北农林科技大学植物保护学院，植保资源与害虫治理教育部重点实验室，陕西杨凌７１２１００； ２河南科技大学林学院，河南洛阳４７１００３） 摘要：【目的】为了更好地了解昆虫气味结合蛋白（ｏｄｏｒａｎｔｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎｓ，ＯＢＰｓ）在梨小食心虫 Ｇｒａｐｈｏｌｉｔａｍｏｌｅｓｔａ （Ｂｕｓｃｋ）嗅觉识别中的作用，并明确其与寄主挥发物的结合特性。【方法】利用 ＲＴＰＣＲ和ＲＡＣＥ技术克隆梨小食 心虫ＯＢＰ基因；采用ＲＴＰＣＲ和实时定量ＰＣＲ对该基因在成虫不同组织和羽化后不同日龄成虫中的表达情况进行 了测定；以Ｎｐｈｅｎｙｌ１ｎａｐｈｔｈｙｌａｍｉｎｅ（１ＮＰＮ）为荧光探针，采用荧光竞争结合试验对 ＧｍｏｌＯＢＰ３蛋白的结合特性进 行了分析。【结果】得到梨小食心虫一个新的气味结合蛋白基因，命名为ＧｍｏｌＯＢＰ３（ＧｅｎＢａｎｋ登录号：ＫＦ３９５３６３）。 ＧｍｏｌＯＢＰ３开放阅读框全长４９２ｂｐ，编码１６３个氨基酸残基，预测分子量和等电点分别为１８７２ｋＤａ和４９３，呈酸 性，具有典型的６个半胱氨酸位点。ＧｍｏｌＯＢＰ３在雌、雄成虫触角和腹部均有表达，成虫在羽化后５ｄ内，雌蛾触角 中ＧｍｏｌＯＢＰ３表达量随羽化后日龄而增加，但雄蛾在羽化后第５天触角中ＧｍｏｌＯＢＰ３表达量显著降低。通过构建 ＧｍｏｌＯＢＰ３原核表达载体，在大肠杆菌Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ中诱导表达并获得了ＧｍｏｌＯＢＰ３重组蛋白。荧光竞争结合实 验对ＧｍｏｌＯＢＰ３蛋白与１６种寄主挥发物及４种性信息素类似物的结合力发现，在供试的４种梨小食心虫性信息素 类似物中，ＧｍｏｌＯＢＰ３蛋白与反８十二碳烯醋酸酯和十二烷１醇不结合，而与顺８十二碳烯醋酸酯和顺８十二碳 烯醇结合，但结合力较弱，结合常数分别为８３００和１０３７０ ｍｏｌ／Ｌ；与１６种寄主挥发物结合能力也不强，其中结合 μ 最强的是 紫罗酮，结合常数为４９３６ ｍｏｌ／Ｌ。【结论】由此推断，ＧｍｏｌＯＢＰ３具有选择性识别和结合各种配基的 β μ 特性。 关键词：梨小食心虫；气味结合蛋白；ｃＤＮＡ克隆；组织表达谱；原核表达；荧光竞争结合 中图分类号：Ｑ９６６　　文献标识码：Ａ　　文章编号：０４５４６２９６（２０１４）０３０２７４１２ ｃＤＮＡｃｌｏｎｉｎｇ，ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｒｏｆｉｌｉｎｇａｎｄｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆｏｄｏｒａｎｔ ｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎＧｍｏｌＯＢＰ３ｉｎｔｈｅｏｒｉｅｎｔａｌｆｒｕｉｔｍｏｔｈ，Ｇｒａｐｈｏｌｉｔａｍｏｌｅｓｔａ （Ｌｅｐｉｄｏｐｔａｒａ：Ｔｏｒｔｒｉｃｉｄａｅ） １，２ １ ２ １， ＳＯＮＧＹｕｅＱｉｎ ，ＸＩＥＸｉｎｇＣｈｅｎｇ，ＤＯＮＧＪｕｎＦｅｎｇ，ＷＵＪｕｎＸｉａｎｇ （１．ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＰｌａｎｔ ＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎＲｅｓｏｕｒｃｅｓａｎｄＰｅｓｔＣｏｎｔｒｏｌ，ＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎ，ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＰｌａｎｔＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ Ａ＆ＦＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｇｌｉｎｇ，Ｓｈａａｎｘｉ７１２１００，Ｃｈｉｎａ；２．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＦｏｒｅｓｔｒｙ，ＨｅｎａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅ ａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ