西花蓟马化学感受蛋白的cDNA克隆、时空表达分析及组织定位.pdfVIP

昆虫 学 报 西花蓟马化学感受蛋白的克隆 时空表达分析及组织定位 张治科 吴圣勇 雷仲仁 宁夏农林科学院植物保护研究所 银川 中国农业科学院植物保护研究所 植物病虫害生物学国家重点实验室 北京 摘要 目的研究西花蓟马 化学感受蛋白 在其嗅觉及化学 感受系统中的作用 方法利用和技术克隆西花蓟马化学感受蛋白基因用 软件进行 序列分析使用 进行同源性比较采用 的法构建了进化树 通过实时定量 检测了西花蓟马不同发育期以及成虫不同组织触角头足胸腹 中该基 因的表达谱 免疫新西兰大白兔制备了 蛋白抗体与样品切片中 蛋白以及 胶体金颗粒 偶联的羊抗兔二抗反应经透射电镜观察对该蛋白在西花蓟马成虫组织中进行免疫定位 结果克隆并鉴定了 一个西花蓟马化学感受蛋白基因命名为 登录号 该基因序列全长 完整开放阅读框 编码 个氨基酸成熟蛋白分子量 等电点 具有化学感受蛋白典 型的 个保守半胱氨酸位点特征 与东亚飞蝗 登录号 的氨基酸序列一致性最高进化关系最近 在西花蓟马不同发育阶段和成虫不同组织中均有表达在 羽化 的雌虫中相对表达量最高其次是 龄若虫蛹和成虫后期表达量最低在触角和足中相对表达量较高 成功构建了重组表达质粒 并诱导表达经柱纯化获得目的蛋白免疫定位表明该蛋白在 西花蓟马触角足头等部位血淋巴中均大量存在 结论 明确了西花蓟马化学感受蛋白基因 的核苷 酸氨基酸序列特征 广泛分布在西花蓟马多个组织及各个发育期据此推测该基因可能在西花蓟马嗅 觉识别感受机械刺激以及调节生长发育等方面扮演重要角色 关键词 西花蓟马 化学感受蛋白 分子克隆 原核表达 表达谱 免疫定位 中图分类号 文献标识码 文章编号 基金项目 现代农业产业技术体系专项资金 北京国家现代农业科技城产业培育项目 作者简介 张治科 男 年生 宁夏同心人 博士研究生 副研究员 研究方向为昆虫生态与综合防治及昆虫化学生态学 通讯作者 收稿日期 接受日期 昆虫学报 卷