生物技术药物制剂与疫苗分析.ppt

生物技术药物制剂与疫苗 Contents 一、概述 生物技术：是应用生物体或其组成部分，在最适条件下，生产有价值的产物或进行有益过程的技术。主要包括基因工程、细胞工程、酶工程、发酵工程、生化工程。 生物技术药物制剂 是指采用现代生物技术,借助某些微生物、植物、动物生产的药品。 生物技术药物的结构特点与理化性质 蛋白质的组成和一般结构 蛋白质是由许多氨基酸按一定顺序排列，通过肽键相连而成的多肽链。 蛋白质的高级结构 包括二级、三级与四级结构。 蛋白质的理化性质 1、蛋白质的一般理化性质 旋光性：由螺旋结构引起，通常为右旋 紫外吸收：苯核在280nm有最大吸收，氨基酸在230nm显强吸收 蛋白质两性性质与电学性质：在不同pH下会成为阳离子，阴离子或两性离子 2、蛋白质的不稳定性 由于共价键引起的不稳定性 蛋白质的水解 蛋白质的氧化 外消旋作用 二硫键断裂及其交换 由非共价键引起的不稳定性： 聚集 宏观沉淀 表面吸附 蛋白质变性 蛋白质类药物的评价方法 液相色谱法：RP-HPLC,IEC,SEC 光谱法:UV,可见吸收光谱，ORD,CD,荧光，IR,拉曼光谱 电泳：SDS,IEF,EC 生物活性测定与免疫测定:重组DNA和杂交瘤技术产品应进行生物活性的测定，蛋白质药物制剂的稳定性也应检测其生物活性。 生物活性检测是利用体内模型或体外组织或活性蛋白质多肽的特异性生物学反应，通过剂量（或浓度）效应曲线进行定量（绝对量或比活性单位）。 免疫测定通常采用免疫化学法 二、蛋白质类药物制剂的处方与工艺 蛋白类药物的一般处方组成 蛋白类注射剂包括： 溶液型注射剂：使用方便，需低温保存 冻干粉注射剂：稳定，但工艺复杂 液体剂型中蛋白类药物的稳定化方法 改造其结构 加适宜辅料（通过加入各类辅料，改变蛋白类药物溶剂的性质是药物制剂中常用的稳定化方法。 ） 固体状态蛋白质药物的稳定性与工艺 冷冻干燥蛋白质药物制剂 需考虑的问题： 选择适宜辅料 辅料对冷冻干燥过程中一些参数的影响 冻干保护剂：甘露醇，山梨醇，蔗糖，葡萄糖，右旋糖酐等 喷雾干燥蛋白质药物制剂： 喷雾干燥工艺广泛应用于蛋白质类药物的控释制剂、吸入剂、微球制剂等新型给药系统的研制中。在喷雾干燥过程中可加入稳定剂，如蔗糖能提高氧血红蛋白（oxyhemoglobin）的稳定性。 缺点是操作过程中损失大，水分含量高 高分子聚合物中蛋白质药物的稳定化 蛋白质药物稳定性 药物的不稳定性通常发生在制备、储存和释放过程中 蛋白质药物不稳定机理有：蛋白分子的伸展；水溶性或水不溶性聚集；水解；脱氨和氧化 在应用W/O/W复乳溶剂挥发法制备PLGA微球时加入稳定剂BSA或海藻糖可有效提高蛋白质稳定性。 三、蛋白质类药物新型给药系统 新型注射（植入）给药系统 临床经验表明，很多蛋白质类药物在体内血浆半衰期短，清除率高，因而需要延长其在体内的平均驻留时间，或改变蛋白质在体内的药物动力学性质，有时需要制成非零级脉冲式释药系统（如疫苗）。为满足这些要求，既可以对蛋白质分子进行化学修饰，也可以控制蛋白质进入血流的释放速度等。目前已有用PEG修饰蛋白质分子以延长蛋白质药物在血浆中的半衰期。例如，腺苷酸脱氨酶（adenosine deaminase，ADA）即采用形成PEG-ADA这种方法，治疗因ADA缺乏而引起免疫缺损综合征的患者，此药已经获FDA批准生产。 控释微球制剂： 首次经FDA批准的蛋白质类药物微球制剂是醋酸亮丙瑞林（leuprolide acetate）聚丙交酯—乙交酯微球。此种微球供肌内注射，用于治疗前列腺癌，可控制释放达30d之久，改变了普通注射剂需每天注射的传统，使用方便。 控释微球制剂常用制备方法 复乳液中干燥法（γ干扰素、白细胞介素、亮丙瑞林、人生长激素、环孢素以及促红细胞生长素（EPO） 等） 低温喷雾提取法 喷雾干燥法 超临界萃取法 脉冲式给药系统：如疫苗或类毒素等抗原蛋白 白细胞介素1α（IL-1α）PLGA微球的制备： Limor Chen等以改良的复乳溶剂挥发法制备。具体方法为： 将含有20mg牛血清白蛋白（BSA）和8.5μg IL-1α的水溶液 50μl与含有200mgPLGA的二氯甲烷0.5ml混合，用探针式超 声乳化（56w）30s，将此初乳分散于1ml用二氯甲烷饱和的 1%（w/v）PVA水溶液中，漩涡混悬形成复乳，再将该复乳倾 入50ml 0.1%（w/w）PVA水溶液中搅拌5min，再加入50ml含 有10%（v/v）2-丙醇的PVA溶液将二氯甲烷抽提到外水相中， 连续搅拌30min后，离心10min收集微球，冰冻干燥成流动性 粉末状微球。由于皮下注射微球后小于10μm微球易被巨噬细 胞吞噬，故