河北省20022004年流行期流感病毒分子流行病学研究.pdfVIP

中 文 摘 要 河北省2002^-2004年流行期流感病毒 分子流行病学研究 摘 要 目的人流行性感冒简称流感，是由甲(A)、乙 ((B), 丙 (C)三型流感病毒分别引起的急性呼吸道传染病，在 我国北方常引起暴发和流行，属国际监测疾病之一。其难 以控制的主要原因是病毒抗原性尤其是血凝素和神经氨 酸酶极易发生变异，使人群通过感染或疫苗获得的免疫力 对新流行株失去作用。研究表明二十世纪引起三次世界大 流行的病毒株均首发于我国，我国已逐渐成为世界公认的 流感监测前哨。为进一步研究我国流感病毒地方株的型别 变迁规律，及时抓住有意义的变异株，指导今后流感的监 测、诊断及试剂和疫苗研制，搞好流感疫情的预测预报和 及时采取有效防制措施，本研究对河北省2002^2004年 两个流行期的流感进行了流行病学监测分析和分子流行 病学研究。 方法按照 《国家流感监测方案》要求，每省选择一 个市的两所具有代表性的医院作为国家流感监测点，监测 本省的流感流行情况，2001年全国23个省、市、自治区 组成了国家流感监测网。方案要求北方每年10月至第二 年3月流感流行季节开展流感监测，其它时间不做监测。 本研究将河北省国家流感监测点2002^-2004年两个流行 期的监测数据作为基础数据。 在保定市 2个国家级流感监测医院的内科和儿科门 中文 摘 要 诊逐日统计流感样病例，对发病3天以内的病例采集咽拭 子标木，接种狗肾细胞 (MDCK)法分离流感病毒，用鸡和 豚鼠的红细胞做血凝试验测定病毒的滴度，通过血凝抑制 (HI)和反转录多聚酶链反应 (RT-PCR)进行型别和亚 型鉴定。并随机抽取2003-2004年流行期分离的4株甲 3亚型流感病毒，比较其与国际国内17株代表毒株的抗 原性差异。合成了一对针对甲3亚型流感病毒血凝素HA1 基因的引物，对4株甲3亚型新分离株的血凝素HA1基因 做了进一步分型鉴定，将RT-PCR产物进行核昔酸序列分 析，绘制出种系进化趋势图谱。 结果 1.2002 2003年和2003-2004年两个流感流行期 监测表明，流感样病例数分别占门诊总病例数的3.67%和 4.7835，其中儿童 (15岁以下)流感样病例分别占4.06% 和4.78%，成人 (15岁以上)流感样病例分别占1.5%和 1.54%，就诊高峰均在1月份。 2.2002^2004年两个流感流行期共采集流感样病例 咽拭子标本703份，用MDCK细胞分离出流感病毒120株， 以12月和1月份病毒检出率最高。经血凝抑制试验鉴定， 其中甲3亚型 “0”相毒株104株，占86.6745，乙型毒株 16株，占13.33%，甲3亚型毒株为优势株。 3.实验表明，新分离到的甲3亚型 “0”相毒株能凝 集豚鼠的红细胞，而几乎不凝集鸡的红细胞，提示分离流 感病毒时应同时采用鸡和豚鼠两种红细胞，以防漏检。 4.用RT-PCR对2株国际代表毒株和2003-2004年流行 期分离的10株甲3亚型流感病毒HA1基因进行了分型分 中文 摘 要 析，结果均扩增出了1110bp的产物，进一步证实其为甲 3亚型病毒，与HI试验结果相一致，故可作为难鉴定病 毒如 “0”相毒株的一种辅助鉴定方法。 5.HA1基因核普酸序列分析表明，随机抽取的4株 2003^-2004年流行期毒株与1992-x1997年间分离的甲3 亚型毒株的同源性在90.2%-94.7%之间。与2002^2003 年分离的甲 3亚型毒株 A/Johannesbur/64/03, A/zhejiang/8/2002 、 A/Zhejiang/11/2002 和 A/ningbo/25/2002的同源性分别为99.7%,98.5%,97.7% 和98.3%，表明2002-2004年河北省甲3亚型流感病毒 活动增强并成为优势株是由于HA1基因发生突变所造成。 6.基因进化分析表明1992年以来，流感病毒种系进 化分支较多，但河北省2003-2004年同一流行期新分离 到的4株病毒与A/Johannesbur/64/03属同一种系，属