树突状细胞经E病毒疫苗刺激用于EB病毒感染介导相关肿瘤治疗的研究.pdfVIP

树突状细胞经EB病毒疫苗刺激用于EB病毒 感染介导相关肿瘤治疗的研究 摘 要 ； i Virus，EBV)是一种人类疱疹病毒，全世界95％ EB病毒(Epstein．Barr 以上的人群在儿童就己感染。它是传染性单核细胞增多症的病因，也与多 种重要的人类癌症相关，如Burkitt’S淋巴瘤(BL)、鼻咽癌(NPC)及何 杰金氏淋巴瘤等。在人类，已在上述肿瘤细胞中检出4种EB病毒相关蛋 白，其中EB病毒膜抗原gp340能引起保护性的中和抗体产生、抗体依赖 性细胞介导的细胞毒性作用(ADCC)和特异性的细胞毒性T淋巴细胞 (CTLs)杀伤作用。因此，gp340作为预防EB病毒原发感染的候选疫苗 受到了广泛重视。，≯≯‘ 树突状细胞(dendriticceils，DCs)是体内最有效的抗原提呈细胞，同单 核细胞、巨噬细胞统称为人体的“哨卫系统”(eustocytesystem)。树突状 细胞能在体内外直接激活初始T淋巴细胞，在激发T淋巴细胞免疫应答 及T淋巴细胞依赖性抗体生成中起重要作用。近来研究表明，应用抗原! 或抗原多肽在体外冲击致敏DCs，可有效地诱导抗肿瘤免疫反应。棚 究中我们通过体外实验研究了用GM．CSF+TNF．o+IL．4+IL．3的细胞因子 组合从人骨髓CD34+造血干／组细胞诱导、分化DCs及鉴定，并进行了DCs 负载EB病毒膜抗原gp340诱导特异性CTLs杀伤EB病毒相关肿瘤细胞 的实验研究。拟为EB病毒相关肿瘤的治疗提供一条新途径。／主要结果如 ＼ 下： 1．采用Mini—MACS分离技术可以从正常人骨髓分离得到高纯度 (90％1的CD34+造血干／祖细胞，且回收率(90％左右)和活细胞率(95％) 均很高，这种方法为进一步获得较纯净DCs提供了保证，符合临床肿瘤 生物治疗时制各大量高纯度DCs的需要，值得推广。 重庆市院士基金资助项目，项目号：6317 ·VI· 造血干／祖细胞向DCs分化，在14天内可以诱导、分化扩增出大量成熟 的DCs，最终可获得的DCs为初始干细胞量的5～10倍，加入IL．3可进 一步增加DCs的产量。 3．我们对扩增得到的DCs从三个方面加以鉴定，①形态观察：DCs 形态呈多形性，表面粗糙有不规则突起，胞浆中细胞器丰富，富含线粒体： ②表面标志的检测：DCs高水平表达CD…③同种异型混合淋巴细胞 反应：DCs可诱导同种异型T淋巴细胞产生明显的增殖反应。因此，根 据SornasseD等提出的判别标准，可以认定：我们从人骨髓细胞中诱导 扩增出的细胞是具有良好刺激活性的DCs细胞，而且无菌、无污染，可 用于持续培养，能达到后续实验的要求。 4．我们根据文献报道设计了EB病毒表面膜糖蛋白gp340负载DCs 的方法，结果发现DCs加工处理抗原后激发T淋巴细胞增殖反应的能力 进一步增强，同时也说明通过本方法获得的DCs具有极强的抗原提呈能 力。 5．在进行EB病毒相关性肿瘤细胞的杀伤实验中，只有负载了抗原 无DCs条件下，仅有T淋巴细胞和抗原gp340，由于缺乏DCs抗原提呈 并刺激T淋巴细胞产生特异性CTLs，故在细胞杀伤试验中T细胞不具有 杀伤肿瘤细胞的能力；同时，DCs如无抗原呈递的对象，其本身是不能 刺激T淋巴细胞产生特异性CTLs的，故在细胞杀伤试验中杀伤肿瘤细胞 的效率极低。 结论与展望： 1．EB病毒膜抗原能够诱导病毒中和抗体的产生，中和EB病毒感染 和对B细胞的转化活性，还可介导抗体依赖的细胞毒作用及刺激T细胞 声生细胞介导的免疫应答，这一过程中抗原提呈细胞发挥了重要作用。我 们的实验证实了以EB病毒膜抗原gp340为主要成分控制EB病毒感染的 EB病毒疫苗可有效激发免疫应答，其中DCs提呈膜抗原gp340可能是EB 重庆市院士基金资助项目，项目号：6317．VII· 病毒疫苗发挥作用的机理之一，我们的工作从一个方面为EB病毒疫苗接 种策略提供了实验依据，相信在不远的将来以gp340为主要成分的EB病 毒疫苗会进入市场并运用于临床。 2．以控制EB病毒感染的疫苗致敏DCs，能促进抗原提呈并启动抗 肿瘤免疫，体外可有效杀伤EB病毒相关肿瘤细胞，从科学和商业上考虑， 随着EB病毒疫苗的开发上市，DCs疫苗作为一种针对E