微囊藻毒素促肝过程中p53、p21基因表达改变及其相关机理研究.pdfVIP

微囊藻毒素促肝癌过程中p53、p21基因表达改变及相关机理研究 研究生：庞春艳 导师：陈华教授 胡志坚副教授 中文摘要 【目的】 mRNA表达水平的变化以及癌前病变组织p53基因突变情况，为阐明微囊藻 毒素致肝癌的分子机理提供依据。 【方法】 1．微囊藻毒素促肝癌过程中p53、p21waftmRNA表达水平的变化 1．1建立二阶段肝癌动物模型：以DEN作启动剂，MC。LR作促癌剂， 并设立空白对照组和DEN对照组。 1．2微囊藻毒素促肝癌过程中p53、p21基因mRNA表达水平的变化： 采用25|l l体系扩增p53、p21基因mRNA，琼脂糖凝胶电泳后在凝胶成像 系统下拍照，用Image—ProPlus图像分析软件对目的基因及内参物(GADPH) 电泳条带进行积分光密度(integralopticaldensity,IOD)澳I]定，以目的基因与内 参的积分光密度比值，作为半定量资料进行统计分析。 2．PCR-SSCP银染法检测肝癌前病变组织p53基因的点突变 DNA提取试剂盒提取实验大鼠肝癌前病变组织DNA，对p53基因高度 保守区(第5、6、7、8外显子)进行PCR，取扩增产物进行聚丙烯酰胺凝胶 电泳，银染检测点突变，并进行统计分析。 【结果】 情况： 空白对照组p53mRNA与内参的积分光密度比值是O．9552± 0．6635，DEN对照组p53 表达水平显著升高(P0．05)。 表达水平没有显著性差别(P0．05)。 3．p53基因第5，6和7外显子单链条带未发现泳动变位，而在第8外显 子条带出现变异，提示p53基因第8外显子有突变发生。与空白对照组的条 对照组未见突变。 【结论】 表达水平增加。 2．在MC．LR促肝癌过程中，p53基因第8外显子发生突变。MC—LR 引起p53基因突变可能是其致肝癌或促肝癌的分子机制之一。 【关键词】微囊藻毒素 促肝癌p53p21”柏RT—PCR突变SSCP onthe 1 inratliver tumor ofp53、p2 Study expression during anditsrelatedmolecularmechanism promotionbymicrocystin—LR Master DegreeCandidate：PangChunyan Advisor：ChenHua，Professor Hu Professor ZhOian，Associate Abstract [ObjectiveI This was todeterminethe and studydesigned expression ofp53．p21”8n the mutationof inratliver tumor MC—LRin point p53gene duringpromotionby order to therelatedmolecularmechanism． explore [Motheds] 1．Theanimal modelwasset with