镉致线粒体损伤干预研究.pdf

复旦大学硕士论文 镉致线粒体损伤及干预研究 中文摘要 镉是一种工业和环境污染物，一旦被人体摄入易在体内积蓄从而引起人体多 系统、多器官损伤。肝脏、肾脏为镉在体内蓄积和损伤的主要靶器官。在细胞内， 线粒体因其在氧化供能与介导细胞凋亡中的重要作用成为控制细胞生死的关键 亚细胞器。同时，线粒体又是一种对外界刺激与损伤十分敏感的亚细胞器。 本研究通过对肾皮质超微结构的观察，以及对分离制备大鼠肝脏、肾脏线粒 体呼吸功能、肿胀效应、膜电位、线粒体活力、超氧自由基水平的测定，从整体 动物和体外线粒体染毒角度分析了镉对线粒体的损伤效应。同时，利用钌红 粒体的损伤机制，并对镉致线粒体损伤进行干预研究。 通过严格的线粒体制备方法可富集得到高纯度线粒体组分，为后续线粒体功 能测定提供符合要求的线粒体样本。 5天大鼠皮下镉染毒实验发现：1．2 bw与1．8 bw镉染 mgCd／kg mgCd／kg 毒可引起明显的肾皮质线粒体嵴断裂、线粒体基质空泡化及线粒体肿胀的发生； 1．8 bw剂量组还有细胞能量供应受阻、胞质空洞和溶酶体增加等现象 mgCd／kg 发生，提示细胞水平的严重损伤。大鼠肾脏线粒体呼吸控制率(RCR)值随镉染 毒剂量增加而降低，且1．8 bw剂量组RCR值显著低于对照组；肾脏 mgCd／kg 线粒体肿胀水平显示出随镉染毒剂量增加而增高的趋势：线粒体膜电位水平随镉 染毒剂量增加而下降，并在1．8 bw剂量组有显著性差异；自由基水平 mgCd／kg 也随染镉剂量增加而增高，并且在1．2 bw和1．8 bw剂量组 mgCd／kg mgCd／kg 显著高于对照组水平。 12周大鼠亚慢性灌胃镉染毒实验发现：4周镉染毒即造成大鼠肾皮质线粒体 肿胀和空泡化发生，I．0 bw和2．0 bw剂量组中均出现严重 mgCd／kg mgCd／kg 的线粒体肿胀、基质空泡化等病理特征，表明Cd2+对肾皮质细胞的严重损伤。 随染毒剂量和染毒时间的增加，肾脏线粒体RCR值均呈下降趋势，表明镉对染 毒大鼠肾皮质线粒体呼吸功能的损伤呈时间依赖性和剂量依赖性加重。染毒4 周，肾脏线粒体超氧自由基水平随染毒剂量增加而增高，表明镉染毒引起肾皮质 抗氧化能力的下降和氧化损伤的加重。此后，线粒体超氧自由基生能力成随线粒 体活力下降而降低。 体外大鼠肝脏、肾脏线粒体镉染毒实验发现：Cd2+呈剂量依赖性抑制肝脏、 肾脏线粒体RCR值：Cd2+也呈剂量依赖性引起大鼠肝脏、肾脏线粒体肿胀。其 复旦人学硕上论文 镉致线粒体损伤及干预研究 EC50分别为为8．27 和Ca2+引起肝脏线粒体肿胀效应的比较显示，Cd2+和Ca2均能呈剂量依赖性引起 肝脏线粒体肿胀，其EC50分别为8．27“M和47．43o．M。其最大肿胀率分别为40％ 和25％左右；Cd2+可呈剂量依赖性引起肝脏、肾脏线粒体膜电位耗散，其EC50 值分别为lO．55 gM和26．83gM。而Cd2+抑制大鼠肝脏、肾脏线粒体活力的EC50 值分别为8．27“M和7．73pM。上述结果提示肝脏线粒体对Cd2+损伤较肾脏线粒 体更为敏感。 通过对工具药干预作用的研究发现：钙离子单向转运体阻断剂RR可显著抑 制各剂量Ca2+及低剂量(10 I-tM)Cd2+引起的线粒体肿胀效应和膜电位耗散作用， 随着Cd2+剂量的增加，RR的阻断效应逐渐减弱。线粒体通透性孔道(MPTP)阻断 剂CsA能有效抑制不同浓度Ca2+引起的肝脏线粒体肿胀效应，但对Cd2+引起的 肝脏线粒体损伤仅有部分抑制作用，而对Cd2+致肾脏线粒体肿胀几乎无效。在