现代酶技术在食品科学领域中的应用固定化酶技术叶玉平课件.pptVIP

广东海洋大学研究生开题报告 菠萝果实后熟软化过程中细胞壁多糖的酶促降解机制研究 The Enzymatic Degradation Mechanism of Cellular Wall Polysaccharides in Pulp Tissues of Postharvest Pineapple Fruit During Ripening 硕士研究生 : 叶玉平导师 : 夏杏洲 副教授专业 : 食品科学研究方向 : 海洋生物资源利用 固定化酶技术简介 1 酶固定化的主要方法 2 固定化酶技术在食品领域的应用 3 主要内容 酶固定化的概念 固定化酶技术简介 酶的固定化是把从生物体提取出来的酶，人工用固体材料将其束缚或限制于一定区域内，从而使酶的运动受到限制，但酶仍能进行其特有的催化反应，并可回收重复使用，该种技术就是酶的固定化技术。 固定化酶技术简介 固定化酶技术的发展 1953年，Grubohofer等人将羧肽酶、淀粉酶、胃蛋白酶等结合固定在聚苯乙 烯树脂重氮化载体上，实现了实验室酶的固定化。 20世纪20年代，科学家们首次发现酶被吸附在骨灰碳粉上仍具有活性的现象 第一阶段 第二阶段 1969年，日本人千火田一郎成功地把固定化氨基酰化酶反应应用于L,D-氨基酸 的光学拆分上，实现了固定化酶的工业化生产。 第三阶段 固定化酶技术简介 适于产业化、连续化、自动化生产 固定化酶的特点 优点 稳定性和最适温度提高 较长时间内可连续生产 反应条件易控制 可增加产物收率，提高质量 酶使用效率高 缺点 酶活力会损失 生产成本高 只能用于水溶性底物 需辅助因子协助才有效 易与产物、产物分离，便于后续分离和纯化 水溶性酶 水不溶性载体 水不溶性酶 （固定化酶） 固定化技术 总体思路 固定化酶技术简介 固定化酶技术简介 固定化技术采用的载体 三种载体 有机高分子载体 无机载体 复合载体 天然高分子载体 合成有机高分子载体 有机高分子载体 天然高分子载体材料：常见的有琼脂、海藻酸钠等，近年来研究比较热门的新载体是甲壳素和壳聚糖及其衍生物、丝素膜（家蚕丝纤维）。 合成有机高分子载体材料：这类材料种类很多，有聚乙烯醇冷冻胶、聚乙烯氧化物载体、Poly共聚物珠状载体无孔聚苯乙烯/聚苯乙烯磺酸钠微球载体、球状纤维素单宁树脂和多空醋酸纤维素球形载体等。 固定化酶技术简介 2010 无机载体 特点：稳定性好、机械强度高、对微生物无毒性、不易被微生物分解、耐酸碱等特性。 在这方面，美国的UOP公司用氧化铝为载体，德国的Milss公司用二氧化硅为载体制备固定化酶取得了显著的成效。 固定化酶技术简介 复合载体 利用有机聚合物载体键合蛋白能力强、易成型，以及无机聚合物载体刚性的大孔结构特点，结合成复合载体。 Bahar研究表明：磁性体Fe3O4与聚苯乙烯含醛化合物一起混合可以制得磁性载体，其固定化葡萄糖氧化酶保留活性可达70%。 固定化酶技术简介 固定化酶技术简介 酶固定化的原则 固定化酶应该有最小的空间位阻 固定化应该有利于生产自动化、连续化 必须注意维持酶的催化活性及专一性 酶与载体必须结合牢固 固定化酶应有最大的稳定性 固定化酶成本要低 酶固定化的主要方法 固定化方法 新型固定化技术 化学法 吸附法 包埋法 分散法 结晶法 交 联 法 共 价 键 结 合 法 传统方法 物理法 离子结合法 酶固定化的主要方法 两种方法比较 缺点：由于包埋物或半透 膜具有一定的空间或立体 阻碍作用，因此对一些 反应不实用 物理法 优点：酶不参加化学反 应，整体结构保持不变， 酶的催化活性得到很好 保留 化学法 优点：可形成相对质量 更大、不溶性的固定化 酶 优点：过程较复杂，形式较 物理法少 酶固定化的主要方法 吸附法 吸附法是利用各种固体吸附剂将酶或含酶菌体吸附在其表面上而使酶固定化的方法。 活性炭、氧化铝、硅藻土、 多孔陶瓷、多孔玻璃、硅胶、 羟基磷灰石。 选择载体原则 （1）要有巨大的比表面积 （2） 要有活泼的表面 （3) 便于装柱进行连续反应 酶固定化的主要方法 包埋法 将酶或含酶菌体包埋在各种多孔载体中，使酶固定化的方法称为包埋法。主要分为凝胶包埋法和微胶囊包埋法。 载体：琼脂、琼脂糖、海藻酸钠、角叉菜胶、明胶、聚丙烯酰胺…… 酶固定化的主要方法 （1）凝胶包埋法 以各种多空凝胶为载体，将酶、细胞或原生质体包埋在凝胶的微孔内的固定化方法。 酶固定化的主要方法 （2）半透膜包埋法 制备方法： 酶， 水， 乙二胺 癸二酰氯+氯仿 将酶包埋在由各种高分子聚合物制成的小球内，制成固定化酶. 酶固定化的主要方法 交联法