迷迭香酸对鱼藤酮诱导的帕金森病模型的保护作用及其机制的分析.pdfVIP

迷迭香酸对鱼藤酮诱导的帕金森病模型的保护作用及机制研究 摘 要 帕金森病（Parkinsons disease ，PD ）是一种多发于中老年的中枢神经系统退行 性疾病，以运动不能、肌僵直、静止性震颤及姿势反射障碍为特征性表现，其病理 学特征是中脑黑质（substantia nigra，SN）多巴胺（dopamine，DA ）能神经元脱失， 残存的神经元内出现路易小体（Lewy bodies ，LBs ）。而alpha-突触核蛋白是 LBs 的 主要成分，其基因错义突变（A53T ，A30P ，E46K ）能够导致家族性PD 。研究已经 证实 alpha-突触核蛋白的异常聚集是 PD 发病机制中的关键因素，因此研究降低 alpha-突触核蛋白的分子或药物成为治疗 PD 的重要策略。 迷迭香酸（rosmarinic acid ，RA ）是一种水溶性的多酚羟基化合物，广泛分布于 植物中，由一分子咖啡酸和一分子 3，4-二羟基苯基乳酸（即丹参素）缩合而成。迷 迭香酸是天然的抗氧化剂，具有抗炎、抗菌、抗病毒和免疫抑制等多种生物活性。 本实验室的前期研究工作表明，迷迭香酸对 6-羟基多巴胺（6-hydroxydopamine， 6-OHDA ）诱导的PD 大鼠 SN 的DA 能神经元具有保护作用，其机制可能与抗氧化、 降低 SN 铁水平有关。在离体实验中，迷迭香酸也可以通过抗氧化作用拮抗神经毒 素 1-甲基-4 苯基吡啶离子（1-methyl-4-phenylpyridium，MPP+ ）和 6-OHDA 导致的 DA 能神经元的损伤。但其确切的神经保护作用的分子机制仍不清楚。由于 alpha- 突触核蛋白在 PD 发病机制中的重要作用，其错义突变和异常聚集能够导致 DA 能 神经元的退行性改变，而氧化应激能够导致 alpha-突触核蛋白的异常聚集，提示迷 迭香酸可能通过其抗氧化作用抑制 alpha-突触核蛋白的异常聚集。研究也证实迷迭 香酸在体外可以抑制 alpha-突触核蛋白纤维的生成，但是迷迭香酸在 PD 中的保护作 用是否与抑制 alpha-突触核蛋白的聚集有关及可能的机制尚不清楚。 鱼藤酮是一种常用的除草剂和杀虫剂，能够通过血脑屏障，通过抑制线粒体呼 吸链复合物 I 的活性，从而导致 SN DA 能神经元的能量合成障碍，进而引起神经 元的死亡。因此，鱼藤酮被用于 PD 模型的制备。与其他的 PD 动物模型相比，鱼藤 酮制备的 PD 模型具有明显的优势，它能够模拟 PD 的病理性特征变化，包括 SN DA 能神经元数目的降低和残存神经元内的 alpha-突触核蛋白的聚集。因此，本实验选 用鱼藤酮制备的 PD 模型，应用免疫荧光、实时荧光定量 PCR 、Western blots 、流式 细胞术等技术，研究了迷迭香酸对鱼藤酮诱导的 alpha-突触核蛋白聚集的作用，并 深入探讨其可能的分子机制。实验结果如下： 1. 鱼藤酮处理 C57BL/6 小鼠 56 天后，小鼠在旋转棒上的停留时间缩短 46% ，与对 照组相比，差别有统计学意义（P0.05 ）；20 mg/kg 及 50 mg/kg 迷迭香酸预保护 万方数据 组小鼠在旋转棒上的停留时间分别增加 83%和 79%，与鱼藤酮组相比，差别有 统计学意义（P0.05 ）。 2. 鱼藤酮处理 C57BL/6 小鼠 56 天后，小鼠 SN DA 能神经元数目减少 42% ，与对 照组相比，差别有高度统计学意义（P0.001 ）；SN 区酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase ，TH ）的表达降低28% ，与对照组相比，差别有统计学意义（P0.05 ）。 20 mg/kg 及 50 mg/kg 迷迭香酸预保护组小鼠 SN DA 能神经元数目与鱼藤酮组相 比分别增加 28%和 41% ，SN