网状原角藻(Protoceratium+reticulatum)的鉴定和毒素检测的分析.pdfVIP

Thesis for the Degree of Master The isolation and identification as well as analysis of toxins about an Protoceratium reticulatum By Wei Ning A Master ’s Degree of Hydrobiology Supervised: Yu bo Liang, Wen Zhao Dalian Ocean University 2015.06 摘 要 虾夷扇贝毒素(Yessotoxins, YTXs)是近年来发现的一类聚醚类海洋生物毒素，主要由甲藻 门中的网状原角藻产生，另外多边舌甲藻和具刺膝沟藻也被报道可产此类毒素。此前世界多 个国家和地区均有检出，该毒素不像传统的腹泻性贝毒会引起腹泻效应，但会对心、肝脏、 神经系统等组织器官造成损伤，是一种对人类和生态系统具有潜在危害的脂溶性毒素。我国 于近年来首次检出了 YTX 及其衍生物，但至今未有网状原角藻或其他两种产毒藻藻华的报 道。本文选取于大连长海海域分离鉴定的一株网状原角藻，通过光学显微镜和电子显微镜对 其形态学信息进行描述，采取单细胞 PCR 分析其 ITS 序列信息；使用液相色谱-质谱联用法 (LC-MS)对其游动细胞和底栖孢囊的产毒状况进行定性定量分析；并对二者的周年种群动态， 以及该海域虾夷扇贝的YTXs 进行分析。 从形态学分析上看，该藻长略大于宽，平均长度为33.5μm，平均宽度为29.5μm ，光镜下 可见游泳的鞭毛和黄绿色色素体；在荧光显微镜下可见各甲板上具有小孔的网状结构，其甲 片式为：3’, 1a, 6’’, 6’’’, 1p, 1’’’’；ITS 序列表明，该藻株与日本的网状原角藻藻株亲缘关系最 近。 通过进行LC-MS 毒素分析，本藻株的游动细胞可产YTX ，平均每细胞产毒量为10±1.25 pg 并有少量的 Homo-YTX 产生，底栖孢囊和游动细胞的毒素组分一致，但毒素含量远高于游 动细胞，平均每细胞产YTX 的量为89±10.78 pg 。 网状原角藻的游动细胞具有明显的季节分布特征，在春季，细胞丰度逐月上升，四月份 达到最高，之后快速减少，五月份仅有极少量检出，此后再无检出。而孢囊则呈现近双峰形 的趋势，在3 月和7 月各出现了一个高值，而最低值则出现在9 月。虾夷扇贝体内的YTXs 在整年的样品中均有检出，其趋势与孢囊丰度的变化相似，但相对而言有滞后的现象。在 5 月和10 月各有一个峰值出现。但从整年数据来看，长海海域虾夷扇贝体内YTXs 含量不高， 未超过欧盟规定的1mg/Kg 食用安全标准 综上所述，网状原角藻是长海海域一种可产YTXs 的有毒赤潮藻类。该藻主要出现在春 季，是一种在低水温下即可产生藻华的甲藻。且底栖孢囊很可能是虾夷扇贝所含YTX 的主要 来源。以上研究是国内首次对YTXs 产毒藻类的生物学和生态学信息进行描述，其结果可以 为网状原角藻种群的监测、毒素分析提供参考方法；为有关部分合理制定监测预警策略，为 有效降低网状原角藻藻华带来的损失提供依据。 关键词：网状原角藻；分类学；毒素分析；种群动态；虾夷扇贝毒素 Abstract Yessotoxins(YTXs) is a kind of polycyclic polyether marine biological toxins. Beside Protoceratium reticulatum, Gonyaulax spinifera and Lingulodinium polyedrum was confirmed as the source of YTXs. YTXs have been detec