白马合剂对对动粥样硬化大鼠腹主动脉蛋白组影响的实验研究.pdf

中文摘要 目的 通过超声二维斑点追踪技术、，组织多普勒技术、westernblot和蛋白 组学实验技术观察白马合剂对AS大鼠血脂水平、心功能、血流动力学及 对动脉粥样硬化大鼠腹主动脉蛋白组的影响，研究白马合剂抗AS的作用 及机制。 方法 分为正常对照组、空白模型组、葱白组、马齿苋组、白马合剂组和普罗布 考组6组，每组lo只。参照郭延松等的方法制备动脉粥样硬化模型：适应 性喂养一周后，正常对照组喂基础饲料和普通自来水，模型组及各治疗组 体重)，以后每隔30天重复注射一次。 于第7天除正常对照组外，其余各组行大鼠主动脉内膜球囊损伤术， 各组于手术后第3天开始给药，给药体积为10ml／kg，正常对照组和空白 模型组给予生理盐水；葱白提取物组按60mg·kg1给药；马齿苋提取物组 给药。每日1次，连续给药16周。 观察动物的一般状态：观察动物的饮食、精神、体重、毛发，大小便 及死亡情况；于实验16周末禁食16h后，取血5ml留置2管，分别分离 ‘ 血清和血浆，检测血浆TC、TG、HDL—C、LDL．C。 Vivid7 观察动物心功能的改变：GE 探头，探头频率为8MHz。探头置于左胸，在取得满意的胸骨旁左室长轴 和短轴二维图像后，将图像储存到光盘上，以便进一步脱机分析。获取连 续3个心动周期的胸骨旁左室长轴及乳头肌水平短轴切面时应该注意内 轴切面使用M型超声测量左心室舒张末期内径(LVIDd)和收缩末期内径 程序二维应变界面中，在收缩末期心内膜显示最清晰时将图像冻结，沿心 内膜边界手动勾画，将自动生成包含心肌内膜、中层和心外膜的感兴趣区 of (region 头肌短轴6个节段的应变曲线图。记录节段心肌的收缩期峰值径向应变 与舒张晚期血流峰值流速(A峰)的比值E／A。 Vivid 颈动脉斑块血流动力学：GE 7彩色超声诊断仪，10L探头，探 头频率为13．0MHz．固定大鼠后，检测大鼠左侧颈总动脉，分别于颈总动 脉近、中、远段三处测量血管内径，并在二维实时状态下将取样容积置于 血管中心，调整最佳取样容积，使超声束与血流方向夹角小于600．在连 续观察数个心动周期后，获得最清晰血流速度频谱曲线冻结图像。依次测 量血流速度、阻力指数(Ⅺ)及脉动指数(PI)。 · 蛋白组学研究：实验结束后，分离腹主动脉，用GEhealthcare双向 电泳和质谱鉴定进行差异蛋白的检测。准备好所需的仪器和试剂后，按照 下列顺序进行实验检测：动物组织蛋白提取与纯化一等电聚焦(蛋白溶解 (灌胶_胶条平衡_◆二向电泳)_染色(凝胶转移一银染一考染一凝胶保 存)_图像分析(凝胶扫描一图片挑选及裁切_图谱分析)_质谱前处理 (挖点_脱色一酶切_肽段浓缩除盐)_质谱检测(点样一质谱分析_数 据库检索)。最后进行质谱鉴定。 ● ， 结果 大鼠的一般状态：适应性喂养一周后，除正常对照组饮食逐渐增加外， 高脂饲料组饮食逐渐减少，空白模型组减少最为显著，和正常对照组比较 差异显著(P0．01)；给药一周后，模型组和各药物组大鼠精神萎靡不振， 活动度明显减少，模型组精神状态最差，葱白提取物组相对精神状态较佳； 和造模前比较，喂养4周后，正常对照组体重增加最多，其余各组体重增 加幅度小于正常对照组；造模给药后一周，大鼠粪便稀薄，小便色黄量少， 以后逐渐变干；除正常对照组毛发光亮外，造模后各组大鼠毛发干枯，没 有光泽；除正常对照组外，各组大鼠均有死亡，死亡动物均表现为：体重 明显减轻、皮毛干枯、精神极度萎靡、行动迟缓，死亡后体检未见明显异 常。 对TC和TG的影响：与正常对照组比较，模型组大鼠TC、TG明显 升高(P0．01)；与空白模型组比较，除普罗布考组可以明显降低TG外 (P0．05)。 ． 水平未见明显改变，LDL．C水平明显升高(P0．01)；与空白模型组比较， 马齿苋组LDL．C明显降低(P0．0