生物工程的灭菌技术.doc

 PAGE 5 生物工程的灭菌技术 麦浩荣 (广东省石油化工设计院 广州 510130) 摘要：本文重点介绍了发酵工程中培养基及有关设备、物料和空气管道的灭菌技术，确保达到无菌要求，满足纯种发酵。并且对阀门的选用做了简单的介绍。 关键词：发酵、灭菌、无菌 前言 生物工程是当代科技的高新技术，是21世纪最具发展潜力的产业。生物工程最大的特点在于充分利用生物物质资源，节约能源，易于实现洁净生产，而且可以实现一般化工技术难于实现的化工过程。本人参与一项生物工程的设计工作，该工程是根据科研成果直接设计转化为工业化大规模生产装置。所生产的产品为透明质酸聚合物(PHA),为生物可降解塑料产品的添加剂。设计主要是根据中试结果进行放大设计。该生物工程包括配料、发酵、絮凝、压滤、造粒、提取、产品干燥回收、溶剂回收等工序。其中配料与发酵属于生物工程，而絮凝及后面的工序属于化学工程。这里主要介绍发酵工程的灭菌技术。常用的发酵工艺流程图见图1所示。 图1 典型的微生物分批培养工艺流程图 二．灭菌技术 生物化学工程是运用化学工程的原理和方法对实验室所取得的生物技术成果加以开发，使之成为生物反应过程的一门科学，是以活的细胞为催化剂或由细胞提出来的酶为催化剂的反应过程。所以必须进行纯种培养，也就是只允许生产菌存在和生长繁殖，不允许其他微生物共存。因为生物反应系统中通常会含有丰富的营养物质，易受杂菌污染，会产生以下不良的后果：  = 1 \* GB3 ① 如果受到杂菌污染，会使生物反应基质或产物因杂菌消耗而损失，造成生产能力下降；  = 2 \* GB3 ② 由于杂菌产生的一些代谢产物，或者杂菌改变了发酵液的某些理化性质，使产物的提取变得困难，造成收得率降低或使产品质量下降；  = 3 \* GB3 ③ 污染的杂菌大量繁殖，会改变反应介质的pH值，从而使生物反应发生异常变化；  = 4 \* GB3 ④ 发生的噬菌体污染，使生产菌细胞裂解，而使生产失败等等。 所以整个发酵过程必须强调无菌操作，牢固确立无菌观念。除了设备应严格按规定要求，保证没有死角，没有构成感染可能的因素外，必须对培养基和生产环境进行严格的灭菌和消毒，防止杂菌和噬菌体污染，达到无菌要求。必须注意几方面：菌体无杂菌，培养基及有关设备管路彻底灭菌，设备严密，空气灭菌。 2.1培养基灭菌 培养基灭菌是指从培养基中杀灭有生活能力的细菌营养体及其孢子，或从中除去之。工业规模上的液体培养基灭菌，杀灭杂菌比除去杂菌更为常用，其中热灭菌最为简便、有效和经济。 对于液体培养基的热灭菌，工程上所要解决的课题是：将培养基中的杂菌总数N0杀灭到可以接受的总数的N，需要多高的温度，多长的时间为合理，这决定与杂菌孢子的热死灭动力学，反应器的形式和操作方法，还决定于培养基中有效成分受热破坏的可接收范围。 分批灭菌 微生物受热被杀死，主要原因是高热能使蛋白质变性。这种反应属于单分子反应，死亡速率可视为一级反应，即与残存的微生物数量成正比。即： -dv/dt=kN (2.1) 式中N为任一时刻的活细菌浓度，个/L；t为时间，min；k为比热死速率常数，min-1。 对式(2.1)积分，取边界条件t0=0,N=N0，得： lnN/ N0=-kt 或 N= N0e-kt (2.2) 维持灭菌温度T不变，经历不同的灭菌时间，检测相应的N 按lnN/ N0对t作图，如图2 所示。直线的斜率为k，k除了决定与菌体的抗热性能之外，还明显地受灭菌温度T的影响。 图2 大肠杆菌的失活 细菌孢子的热灭动力学与营养体细胞的有所不同。如图3所示。 图3 嗜热脂肪芽孢杆菌孢子的热死速率 从图3可以推测，细菌孢子壁具有较大的热阻。但霉菌孢子的热阻比细菌的小的多(见表1)，这可能与孢子壁的化学成分及结构有关。当温度超过120℃时，热阻极强的嗜热脂肪芽孢杆菌孢子的热死灭动力学也接近与一级反应规律。 表1 典型发酵环境中各种微生物对温热灭菌的相对热阻 生物体种类相对热阻营养细胞和酵母1.0细菌孢子3x106霉菌孢子2~10病毒与噬菌体1~5由表1 可以得知，对培养基进行灭菌必须以细菌孢子为杀灭对象。营养细胞易于受热死亡，表明其热死速率常数k值很高，在120℃灭菌，其k值可大至1010(min