急性毒性与遗传性体外高通量筛选方法的研究.pdf

英文缩略词 2一AF 2一氨基芴 2--aminofluorene 4--NQO4一硝基喹啉一N一氧化物 4--nitroquinoline--N--oxide B[a]P苯并芘 benzo[a]pyrene CP 环磷酰胺 cyclophosphamide DMSO sulfoxide 二甲基亚砜Dimethyl MMS 甲基甲烷磺酸酯 methanesulfonate methyl MNNG N一甲基一N’一乙基一甲基亚硝基胍 RA 全反式视黄酸 A11．trans．Retinoicacid SDS 十二烷基硫酸钠 Sodium sulfate dodecyl 急性毒性与遗传毒性体外高通量筛选方法的研究 摘要 随着组合化学等新技术的发展，被合成及被发现的化合物越来越多，它们对 毒性筛选的需求也越来越迫切。传统的毒性评价实验需要消耗大量的实验动物与 受试化合物，而且实验周期长、耗资大，不能满足新化合物研发的需求，因此， Screening， Throughput 建立符合“4R”原则的体外毒性高通量筛选方法(High HTS)已成为毒理学方法学研究的一个重要发展趋势。 HTS是上世纪术发展起来的一种高新技术，与传统的筛选试验相比，它具 有快速、灵敏、所需化合物的样本量少等优点，现已广泛用于先导化合物和药效 的筛选。如将HTS技术与毒性试验相结合，建立高通量的毒性筛选方法，能够 在早期发现不适于进一步研究丌发的新化合物，及时对化合物作出取舍决定，这 无疑具有重要的实际意义。急性毒性和遗传毒性是从毒理学角度决定新化合物是 否适于进一步研究开发的主要依据，因此成为目前国际上在这方面的研究热点之 一。本研究的目的是建立可用于高通量筛选急性毒性与遗传毒性的试验方法，为 建立急性毒性与遗传毒性体外高通量筛选系统提供科学依据； 一、 急性毒性的体外高通量筛选方法的建立 LD50是目前公认的衡量化合物急性毒性的主要指标．但作为替代整体动物 试验的体外细胞毒性尚无明确公认的指标。国外已有资料表明，体外的细胞毒性 指标Ic∞一IC30与体内的急性毒性评价指标LDso间有良好的相关性，它们在很 大程度上反应了体内的急性毒性作用。因此，本研究内容之一是拟通过分析ICso --IC30与体内急性毒性LD50的相关性，确定一个体外的评价指标ICx。 目÷H检测细胞毒性的方法中一般认为以LDH法、中性红法、MTT法及刃天 青法较好，也较常用。本研究的内容之二是通过对这四种不同的检测方法进行比 较，以筛选一种相对适于体外筛选的方法。 本研究选用47种不同毒性的受试化合物作用于体外微孔板培养的人肝肿瘤 细胞HepG2细胞，用四种不同的检测细胞毒性的方法进行检测，分别计算了IC50、 过系统的比较四种检测方法及血种检测指标，最后确定’个与LD5。相关系数最 大的1c4i为体外评价指标(R2-0．7793)。 通过对四种检测方法的比较，结果表明．中性红法测得的检测指标与LD50 的相关性要比其它三种方法好，且具有统计学意义，故可认为，中性红法的检测 结果能很好的反映体内实验结果，冈此确定陔法为体外毒性检测方法。 本研究所采用的47种受试物，结构不同，机制各异，毒性亦各不相同(高 选用的受试物不论是在数量上还是在性质上都有良好的代表性。本研究选用的人 肝肿瘤细胞HepG2细胞